Potencial terapêutico de miR-9 e miR-29 na doença de Alzheimer

• Autor(a) principal: Baptista, Bruno Miguel Cameira
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/9809
• topic: Doença de Alzheimer; Mecanismo de Silenciamento; Microarn-29; Microarn-9; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas::Ciências Biomédicas

A demência é uma síndrome que está relacionada com a idade, apresenta várias causas e são raras as que se podem tratar ou prevenir eficazmente. A forma de demência mais frequente é a doença de Alzheimer, uma doença cerebral progressiva e degenerativa, irreversível e sem cura. A doença de Alzheimer é caracterizada por várias alterações morfológicas/patológicas, sendo as principais a acumulação extracelular de péptidos ß-amilóides, denominados como placas Aß, assim como a acumulação intracelular da proteína tau, a qual está associada a lesões intraneuronais e fibrilares que consistem em agregações de filamentos helicoidais emparelhados, compostos pela proteína tau hiperfosforilada, associada a microtúbulos, também conhecidos como emaranhados neurofibrilares. Diversas evidências mostram ainda que a acumulação de péptidos Aß leva também a um aumento da severidade da patologia tau. Como referido, atualmente a doença de Alzheimer, bem como outras doenças neurodegenerativas, não apresentam cura e as terapias existentes apenas diminuem temporariamente os sintomas. Desta forma uma abordagem promissora poderá ser a utilização de certos miARNs para o silenciamento da expressão de várias proteínas envolvidas no surgimento e progressão da doença de Alzheimer. Os miARNs representam a classe de ARNs não codificantes que atuam como potentes reguladores da pós-transcrição da expressão génica. Desta forma através dos microARNs consegue-se a inibição pós-transcricional da expressão das respetivas proteínas, causadoras do surgimento e progressão de várias doenças. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar o efeito do pre-miR-9 e pre-miR-29, como agentes terapêuticos na DA, procurando a diminuição da expressão de proteínas alvo envolvidas na patologia, nomeadamente a APP, BACE1 e presenilina, na linha celular N2a695. Com a realização do projeto verificou-se que tanto o pre-miR-9, como o pre-miR-29b têm efeito nas proteínas da via amilóide em estudo. De forma geral foi observado um maior efeito pelo pre-miR-9 na APP e na presenilina e um maior efeito do pre-miR-29b na BACE1. No entanto foi ainda obtido um maior silenciamento da expressão da presenilina por parte do pre-miR-29b em estudos de western blot mas, por RT-qPCR e imunocitoquímica não se verificou uma diferença significativa entre a sinergia do pre-miR-9 e pre-miR-29b e o seu uso individual. Relativamente à BACE1 verificou-se um silenciamento superior após transfeção das células com o pre-miR-29b relativamente ao pre-miR-9 ou à co-transfeção com ambos os pre-miARNs. Em relação à APP verificou-se a inibição da sua expressão, induzida quer pelo pre-miR-9 quer pelo pre-miR-29b, isoladamente ou transferidos em simultâneo. Em suma, com o trabalho realizado foi possível verificar uma relação quer do pre-miR-9, quer do pre-miR-29b na regulação da expressão das proteínas estudadas (presenilina, BACE1 e APP). Num futuro próximo, pretende-se confirmar e aprofundar esta análise, especialmente nos casos que não foram previamente reportados. De uma forma mais específica, será interessante confirmar a ação regulatória do pre-miR-29b sobre a expressão da presenilina, assim como confirmar a possível relação destes pre-miRs com o silenciamento da expressão da APP, que não foram ainda evidenciados na literatura. O conhecimento e melhor compreensão destas vias associadas ao silenciamento génico é de extrema importância, visto que estes pre-miRs poderão ser agentes terapêuticos com interesse de aplicação no tratamento da doença de Alzheimer.