Realização do método GASMoc em Mycobacterium bovis (BCG) em amostras microbiológicas

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Moreno, Rosana Lopes
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.21/14854
Resumo: Mestrado em Tecnologias Moleculares em Saúde
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spelling Realização do método GASMoc em Mycobacterium bovis (BCG) em amostras microbiológicasTuberculoseMycobacterium bovisBCGTécnica de Ziehl NeelsenMétodo GASMoCTuberculosisZiehl-Neelsen tecniqueGASMoC methodMestrado em Tecnologias Moleculares em SaúdeNas infeções causadas pelo gênero Mycobacterium identificar a espécie é importante para distinguir entre as cepas e agrupá-las por critérios de interesse para microbiologistas e clínicos, influenciando inclusive no esquema de tratamento a ser aplicado. Segundo a World Health Organization, em 2014 a tuberculose atingiu o mesmo patamar que a infeção por Human Immunodeficiency Virus (HIV) em relação à mortalidade. A técnica de Ziehl-Neelsen (ZNT) é o método de coloração mais utilizado para a deteção dos BAAR bacilos álcool ácido resistentes (BAAR) e usa uma mistura aquecida de cabol-fucsina, que contém fucsina básica e fenol. Considerando que a fucsina é o componente responsável pela coloração rosada de BAAR, o papel do fenol não é completamente compreendido e foi sugerido que sua exclusão não afeta a capacidade de deteção do ZNT. Uma vez que o fenol é altamente tóxico e induz várias lesões em diversos órgãos quando exposto de forma prolongada, e tendo em conta que já foi observado que o método GASMoC é o método alternativo que não utiliza o fenol e é eficaz a detetar BAAR em secções histológicas, o objetivo deste estudo é determinar a capacidade de deteção de M. bovis BCG em amostras microbiológicas (urina) pelo método de GASMoC. Um total de 32 esfregaços, inoculados com M. bovis BCG foi analisado no Laboratório Germano de Sousa entre o mês de Fevereiro ao mês de Maio de 2021, recorrendo ao método de GASMoC em paralelo com ZNT, onde foram utilizadas duas diluições (1:10 e 1:100) para ambos os métodos. O método de GASMoC foi otimizado com vários ácidos de diferentes concentrações e com a fucsina básica de diferentes concentrações. Nos 32 esfregaços analisados, 12 testaram positivo (75%) para a ZNT e para duas diluições feitas e 4 testaram negativo em diluições de 1:100, em contrapartida os 16 esfregaços analisados para o método de GASMoC testaram negativos para ambas diluições (1:10 e 1:100). O resultado da positividade foi de 37,5% e 62,5% de negatividade. Na otimização do método GASMoC na amostra de urina os resultados apresentaram algumas alterações dos parâmetros, mas ainda assim não se consegue detetar M. bovis BCG. Em conclusão pode-se observar que a ZNT obteve maior sensibilidade em relação ao método GASMoC. A coloração permitiu detetar M. bovis BCG mesmo em baixas concentrações em ambas diluições.ABSTRACT - In infections caused by the genus Mycobacterium, identifying the species is important to distinguish between strains and group them by criteria of interest to microbiologists and clinicians, including influencing the treatment regimen to be applied. According to the World Health Organization, in 2014 tuberculosis reached the same level as Human Immunodeficiency Virus (HIV) infection in terms of mortality. The Ziehl-Neelsen technique (ZNT) is the most commonly used staining method for the detection of alcohol-acid-fast bacilli (AFB) and uses a heated mixture of cabol-fuchsin, which contains basic fuchsin and phenol. Considering that fuchsin is the component responsible for the pink color of AFB, the role of phenol is not fully understood and it has been suggested that its exclusion does not affect the detection ability of ZNT. Since phenol is highly toxic and induces several lesions in various organs when exposed to prolonged exposure, and taking into account that it has already been observed that GASMoC method is the alternative method that does not use phenol and is effective in detecting BAAR in histological sections, the aim of this study is to determine the ability to detect M. bovis BCG in microbiological samples (urine) by the GASMoC method. A total of 32 smears inoculated with M. bovis BCG were analyzed at the Germano de Sousa Laboratory from February to May 2021 using the GASMoC method in parallel with ZNT, where two dilutions were used (1: 10 and 1:100) for both methods. The GASMoC method was optimized with various acids of different concentrations and with basic fuchsin of different concentrations. In the 32 smears analyzed, 12 tested positive (75%) for ZNT and for two dilutions made, and 4 tested negative in 1:100 dilutions, on the other hand, the 16 smears analyzed for the GASMoC method tested negative for both dilutions (1: 10 and 1:100). The result of positivity was 37.5% and 62.5% of negativity. In the optimization of the GASMoC method in the urine sample, the results showed some changes in the parameters, but still, it is not possible to detect M. bovis BCG. In conclusion, it can be observed with ZNT staining obtained greater sensitivity in relation to the GASMoC method. The staining allowed the detection of M. bovis BCG even at low concentrations in both dilutions.Instituto Politécnico de Lisboa, Escola Superior de Tecnologia da Saúde de LisboaRamos, Ana LúciaRCIPLMoreno, Rosana Lopes2022-07-20T11:27:24Z2022-052022-05-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.21/14854TID:203015789porMoreno RL. Realização do método GASMoc em Mycobacterium bovis (BCG) em amostras microbiológicas [dissertation]. Lisboa: Escola Superior de Tecnologia da Saúde de Lisboa/Instituto Politécnico de Lisboa; 2022.203015789info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-08-03T10:11:35Zoai:repositorio.ipl.pt:10400.21/14854Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T20:22:35.094252Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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