Caraterização de leveduras imobilizadas por citometria de fluxo

• Autor(a) principal: Correia, Andreia Elisa Fernandes
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/12582
• topic: Biotecnologia industrial; Leveduras; Citometria de fluxo

O trabalho apresentado nesta tese realizou-se entre Setembro de 2012 a Outubro de 2013 e teve como objetivo principal a implementação da técnica de citometria de fluxo na Proenol - Indústria Biotecnológica, Ltd. Para a realização deste trabalho recorreu-se à técnica multiparamétrica de citometria de fluxo, para caraterizar células de levedura, e à cinética fermentativa, para monitorizar a evolução das fermentações. A caraterização focou-se nas propriedades fisiológicas das leveduras permitindo um acompanhamento da evolução e heterogeneidade da vitalidade e do estado adaptativo das células de levedura. Os parâmetros monitorizados por citometria de fluxo neste trabalho foram: células viáveis; células metabolicamente ativas; células com membrana íntegra; lípidos neutros e trealose. A levedura utilizada foi Saccharomyces cerevisiae imobilizada numa matriz de alginato de cálcio, identificada comercialmente por ProElif® para produção de espumantes, sendo inoculada diretamente no vinho. Todavia, as esferas de ProElif ® podem ser previamente rehidratadas para casos específicos, como os das paragens das fermentações em garrafas. Com o aparecimento de um nicho de mercado que utiliza o ProElif® para reiniciar fermentações paradas, surgiu o interesse por parte da empresa Proenol em avaliar o efeito da rehidratação sobre a levedura imobilizada ProElif® e, em simultâneo, comparar a inoculação de leveduras com e sem rehidratação em vinho. Outro interesse demonstrado pela empresa e que foi alvo de estudo neste trabalho, prende-se com a conservação das leveduras imobilizadas em condições diferentes das recomendadas pela Proenol. Neste estudo, foi avaliado o impacto de temperaturas superiores às recomendadas e acompanhou-se o estado fisiológico das leveduras durante 4 meses de conservação. Os resultados obtidos neste trabalho demonstraram que a rehidratação é uma etapa importante para melhorar a cinética fermentativa, tendo-se observado um arranque de fermentação mais rápido e uma redução na duração da segunda fermentação. No estudo de conservação, constatou-se que as leveduras poderão ser conservadas tanto à temperatura A como à temperatura B, mantendo viabilidades e vitalidades semelhantes. No fim do ensaio observou-se que as leveduras produzidas com a mesma composição mantêm uma boa viabilidade e vitalidade sem variações da heterogeneidade populacional. As células de leveduras conservadas à temperatura C demonstraram ser incapazes de sobreviver embora tenham indicado a possibilidade de sobrevivência por períodos curtos de tempo.