Modulation of Bax by PKCε: an approach to eliminate cancer cells

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Pereira, Soraia Raquel Azevedo
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1822/34788
Resumo: Dissertação de mestrado em Bioquímica Aplicada
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spelling Modulation of Bax by PKCε: an approach to eliminate cancer cells577.1576.3577.2Ciências Naturais::Ciências BiológicasDissertação de mestrado em Bioquímica AplicadaApoptosis is a type of cell death, known as a highly regulated program of cellular suicide; however this process is often deregulated in tumor cells. A mechanism used by tumor cells to evade apoptosis is the alteration of the different members of the Bcl-2 family. These proteins control a key step in the intrinsic apoptotic pathway: permeabilization of the outer mitochondrial membrane and release of several apoptotic factors. The pro-apoptotic members Bax and Bak are essential for this permeabilization, since deletion of either protein compromises the intrinsic apoptotic pathway. These proteins may be regulated by members of the Bcl-2 but also by other proteins, such as the protein kinase C (PKC) family. The PKC family consists of kinases that regulate a variety of cellular functions. Of these, PKCepsilon (PKC) is involved in carcinogenesis and has been considered an oncogene. It has been shown that this protein increases the expression of antiapoptotic members of the Bcl-2 family and inhibits the pro-apoptotic members such as Bax. The interaction between Bax and PKC in mammalian cells prevents Bax translocation to the outer mitochondrial membrane, leading to a decrease in its activation. Identifying residues required for this interaction is therefore crucial to design a strategy to inhibit it. In this work, we aimed to identify residues required for the Bax/PKC interaction. For this purpose, different domains of PKC cloned in frame with the FLAG epitope in a yeast inducible expression vector were co-expressed with Bax in Saccharomyces cerevisiae, in order to evaluate their interaction with Bax. An alternative approach using yeast-two-hybrid was also pursued to verify the interaction between these two proteins. Our ultimate goal is to develop specific modulators to target the PKC/Bax interaction that could open the door to new clinical opportunities for cancer treatment.A apoptose é um tipo de morte celular, mais conhecida como um programa de suicídio celular altamente regulado. No entanto, em células tumorais este processo está frequentemente desregulado. Um mecanismo usado pelas células tumorais para escapar à apoptose é a alteração dos níveis de expressão dos diferentes membros da família Bcl-2. Estas proteínas controlam um passo essencial da via apoptótica intrínseca, a permeabilização da membrana mitocondrial externa e a libertação de vários fatores apoptóticos. Os membros pró-apoptóticos Bax e Bak são essenciais para esta permeabilização, pois a deleção de ambas as proteínas compromete a via apoptótica intrínseca. Estas proteínas podem ser reguladas pelos membros da família Bcl-2 mas também por outras proteínas, como as proteínas da família da cinase C PKC). A família PKC é uma família de cinases que regulam uma grande variedade de funções celulares. Em particular, a PKCepsilon (PKC) está envolvida na carcinogénese e tem sido considerada um oncogene. Tem sido demonstrado que esta proteína aumenta a expressão dos membros anti-apoptóticos da família Bcl-2 e inibe os membros pró-apoptóticos, como a proteína Bax. A interação entre a PKC e a proteína Bax em células de mamíferos leva a que haja uma diminuição da ativação da Bax e da sua translocação para a membrana mitocondrial externa, impedindo que a Bax desempenhe a sua função na apoptose. Assim, a identificação dos resíduos responsáveis para esta interação torna-se extremamente importante para que se consiga encontrar um método de a inibir. Neste trabalho pretendeu-se identificar os resíduos necessários para essa interação. Para este efeito, os diferentes domínios de PKC clonados como fusões com o epítopo FLAG num vector de expressão indutível em levedura, foram coexpressos com Bax em Saccharomyces cerevisiae a fim de avaliar a sua interação com Bax. Uma abordagem alternativa usando a técnica de Yeast-two-hybrid também foi efetuada para verificar a interação entre PKC e Bax. O objetivo final seria o desenvolvimento de moduladores específicos para inibir a interação PKC/ Bax de modo a abrir a porta para novas oportunidades clínicas no tratamento de cancro.Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) - Projetos PEst-OE/BIA/UI4050/2014, FCT-ANR/BEX-BCM/0175/2012 e EXPL/BEX-BCM/0056/2012.FEDERChaves, S. R.Côrte-Real, ManuelaUniversidade do MinhoPereira, Soraia Raquel Azevedo20152015-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/1822/34788eng201258188info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-07-21T12:17:51Zoai:repositorium.sdum.uminho.pt:1822/34788Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T19:10:32.900435Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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