Betacellulin and Neurogenesis in the Adult Central Nervous System
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2015 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | eng |
Título da fonte: | Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/10316/31230 |
Resumo: | Dissertação de mestrado em Biologia Celular e Molecular, apresentada ao Departamento de Ciências da Vida da Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra |
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Betacellulin and Neurogenesis in the Adult Central Nervous SystemNeurogénese adultaZSVBetacelulinaSeeDBClarityCRISPR/CAS 9Dissertação de mestrado em Biologia Celular e Molecular, apresentada ao Departamento de Ciências da Vida da Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de CoimbraNeural stem cells (NSCs) reside in special niches in the adult brain, including subventricular zone (SVZ) of the lateral ventricle and subgranular zone (SGZ) of the dentate gyrus. Blood vessels are an important coumpound of the neurogenic niches as they secreate proteins such as betacellulin (BTC) that stimulate NSC proliferation, self-‐ renewal and differentiation. BTC is a member of the epidermal growth factor (EGF) family of ligands, and has been widely studied in many different contexts. Recently, it has been demonstrated that, in vitro, BTC can induce NSC proliferation, promote self-‐renewal and prevent spontaneous differentiation. In vivo, BTC can also promote neurogenesis. BTC is released into the neurogenic niche by endothelial cells of the microvasculature and by the choroid plexus (CP). It is thought that BTC activity in NSCs is mediated through ErbB1 and ErbB4 receptors whose activation stimulate the AKT and MEK signalling pathways. In my thesis I carried out analysis understanding the influence of BTC and other growth factors on NSCs in vitro using the neurosphere assay and measuring neurospheres number and size. I also studied the importance of AKT and MEK signalling pathways in NSCs cultivated in medium supplemented with different growth factors including BTC. I observed an increase in cell cycle arrest when inhibitors of both signalling pathways were added together in all culture conditions. Studies to better characterize the interaction between neurogenic niche and BTC were also carried out using newly developed visualisation techniques, SeeDB and CLARITY that allowed us to have a 3D perspective. In parallel, I made BTC conditional and BTC reporter contructs for generating mice using newly developed CRISPR/ Cas 9 technique. These mice will allow us to better understand parallel, I made BTC conditional and BTC reporter contructs for generating mice using newly developed CRISPR/ Cas 9 technique. These mice will allow us to better understand the relative importance of BTC in adult NSCs and whether BTC transcription is modulated As células estaminais neuronais estão localizadas em nichos celulares especializados no cérebro adulto, incluindo a zona subventricular (ZSV) no ventrículo lateral e a zona subgranular (ZSG) no giro denteado. Os vasos sanguíneos são um componente importante dos nichos neurogenicos pois eles secretam proteínas como é o caso da betacelulina (BTC) que estimula a proliferação, auto-‐renovação, e diferenciação das células estaminais neuronais. A BTC é um membro da família de ligandos do factor de crescimento epidermal, e tem sido amplamente estudada em muitos contextos diferentes. Recentemente, foi demonstrado que, a BTC induz a proliferação, promove a auto-‐ renovação e previne a diferenciação espontânea das células estaminais neuronais, in vitro. In vivo, a BTC também promove a neurogénese. A BTC é libertada no nicho neurogénico pelas células endoteliais da microvasculatura e pelo plexo coróide. Pensa-‐se que a atividade da BTC nas células estaminais neuronais é mediada pelos receptores ErbB1 e ErbB4, cuja ativação estimula as vias de sinalização AKT e MEK. Na minha tese, procedi a análises por forma a perceber a influência da BTC e outros factores de crescimento nas células estaminais neuronais, in vitro, usando para isso o ensaio de neuroesferas bem como medindo o diâmetro e contando o número de neuroesferas. Também estudei a importância das vias de sinalização AKT e MEK nas células estaminais neuronais postas em cultura em meio suplementado com diferentes factores de crescimento incluindo a BTC. Em todas as condições de cultura, eu observei um aumento da paragem do ciclo celular quando foram adicionados os inibidores de ambas as vias de sinalização em conjunto. Foram também levados a cabo estudos para melhor perceber a interação entre o nicho neurogénico e a BTC usando para isso novas técnicas de visualização , como é o caso do SeeDB e do CLARITY que nos permitiu ter uma perspectiva 3D dessa mesma interação. Em paralelo, eu criei construções para gerar ratos condicionais e ratos repórter, usando a nova técnica CRISPR/Cas 9. Estes ratos irão permitir-‐nos melhor perceber a importância relativa da BTC nas células estaminais adultas e também perceber onde a transcrição da BTC é modulada 2015info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesishttp://hdl.handle.net/10316/31230http://hdl.handle.net/10316/31230TID:201671794engSANTOS, Inês da Costa Santos - Betacellulin and neurogenesis in the adult central nervous system. Coimbra : [s.n.], 2015. 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