Efeito anti tumoral dos canabinóides em glioblastoma: modulação pela adenosina

• Autor(a) principal: Rosa, Carolina Boialvo
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/10547
• topic: Adenosina; Astrócitos e Recetores Cb1; Canabinóides; Glioblastoma; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas::Ciências Biomédicas

Os gliomas, tumores do sistema nervoso central (SNC), incluem a maioria dos tumores cerebrais malignos, e constituem uma importante causa de morte por cancro em todo o mundo. Deste grupo de tumores faz parte o glioblastoma (GBM), astrocitoma de grau IV e a forma mais maligna de gliomas, com elevada heterogeneidade celular, grande capacidade infiltrativa, baixa metastização, reincidência local, resistência às terapêuticas e baixa taxa de sobrevivência. Os tratamentos disponíveis não têm apresentado resultados satisfatórios, por isso é necessário recorrer a metodologias inovadoras e direcionadas para as singularidades das células de GBM. O uso de derivados de Cannabis sativa L. tem suscitado um interesse particular devido aos seus efeitos anti-proliferativos, pró-apoptóticos e anti-tumorais, particularmente em células de GBM. Nessas células, os canabinóides atuam através dos recetores do tipo 1 e 2 (CB1 e CB2, respetivamente), acoplados a proteína G. Os genes dos recetores dos canabinóides são regulados pela metilação das suas regiões promotoras. A adenosina (Ado), a qual se acumula nas regiões de hipoxia encontradas no GBM, pode regular a metilação de diversos genes. O presente trabalho teve como objetivo, investigar a possibilidade de concentrações elevadas de Ado puderem modular o efeito anti-tumoral dos canabinóides e a expressão de recetores destes em GBM. Para tal, o efeito de um agonista sintético não seletivo dos recetores CB1 e CB2, o Win 55 212-2 (Win), na viabilidade/proliferação celular e na citotoxicidade em linhas celulares GBM foi avaliado usando os ensaios de MTT e de libertação da desidrogenase do lactato (LDH), respetivamente. A expressão do recetor CB1, mais comum no sistema nervoso, foi avaliada por PCR em tempo real (RT-PCR). Começou-se por testar qual a concentração de Win com melhor efeito anti-proliferativo em três linhas de GBM (U373, U87 e SNB19) e em células de astrócitos humanos normais (HA). As células foram incubadas por 72 h na presença de Win. Inicialmente, foi estudada uma gama de concentrações de Win entre 0,1 µM e 30 µM; a concentração de 5 µM foi selecionada para estudos posteriores, pois produziu 60%-90% de inibição da proliferação/viabilidade celular em todas as células estudadas. Noutras experiências as células foram incubadas durante 72h com Win (5 µM), na presença ou na ausência de Ado (30 µM) e na presença ou na ausência de um cocktail de antagonistas dos recetores da adenosina (C.A.). Em algumas experiências, a concentração endógena de Ado foi aumentada usando um inibidor da cinase da Ado, o ABT-702 (30 µM) (ABT). Na presença de C.A., a Ado foi capaz de reduzir a inibição da proliferação/viabilidade celular induzida pelo Win, em células U373, enquanto que o ABT na presença de C.A. reduziu a inibição da proliferação/viabilidade celular induzida por Win nas linhas U373, U87, SNB19 e em HA. O facto da atenuação do efeito anti-proliferativo do Win pela Ado exógena, nas células U373, e pelo aumento da Ado endógena pelo ABT, em todos os tipos de células estudadas, não ser prevenida pelo bloqueio dos recetores da Ado pelo CA, indica que esta atenuação não é mediada por ativação dos recetores da Ado. No caso dos ensaios de citotoxicidade, o Win (5 µM) produziu um aumento da libertação de LDH em todas as células estudadas, quer na ausência quer na presença do C.A. O ABT (30 µM) na presença de C.A. reduziu a inibição da libertação de LDH induzida por Win apenas na linha U87 e em HA. A expressão do gene do recetor CB1 dos canabinóides foi avaliada nas três linhas celulares de GBM e em HA, tratadas com Ado ou ABT, e observou-se que na linha U87 houve uma redução na expressão do recetor CB1 na presença de ABT. Em conclusão, Win causou uma diminuição acentuada na proliferação/viabilidade celular e um aumento na morte celular avaliada pela liberação de LDH em todas as três linhas celulares de GBM e em HA. O efeito anti-proliferativo e citotóxico de Win foi significativamente atenuado pelo aumento da concentração de Ado através de um mecanismo independente de recetor em todas as três linhas celulares GBM estudadas.