Effect of salt type on PEGylated lysozyme adsorption in hydrophobic interaction chromatography: a calorimetric study

• Autor(a) principal: Gonçalves, Ana Isabel da Silva
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/5552
• topic: Adsorção; Cloreto de Sódio; Cromatografia de Interação Hidrofóbica; Lisozima; Microcalorimetria de Fluxo; Peguilação; Sulfato de Amónio; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Engenharia Química

A utilização terapêutica de péptidos e proteínas tem adquirido cada vez mais importância nos últimos anos. No entanto, a administração destas macromoléculas, pela sua natureza biológica, acarretam alguns problemas, como a suscetibilidade para a degradação enzimática, pouco tempo de circulação e baixa solubilidade e imunogenicidade, o que leva a uma redução na eficácia terapêutica. Uma maneira de ultrapassar este problema é ligar moléculas de polietileno-glicol (PEG) de modo covalente a proteínas terapêuticas. Este processo, denominado PEGuilação, normalmente resulta numa população de espécies de conjugados, além da proteína não modificada. As espécies combinadas podem diferir em termos do número de cadeias de PEG ligadas e da sua localização, o que influencia todo o processo de purificação. Várias técnicas cromatográficas foram utilizadas para resolver as misturas resultantes de reações de PEGuilação, tais como a cromatografia de exclusão molecular e a cromatografia de troca iónica. Comparativamente, pouco trabalho tem sido feito com a cromatografia de interação hidrofóbica. Durante as últimas décadas esta técnica tem sido desenvolvida por um certo número de investigadores e, é hoje considerada muito poderosa para a separação e purificação de biomoléculas. Um estudo mostra inversão na ordem de eluição das isoformas de lisozima PEGuilada, dependendo do tipo de sal usado como modulador (sulfato de amónio ou cloreto de sódio). Apesar de o cloreto de sódio apresentar melhores resultados, o mecanismo de separação ainda é desconhecido. A análise termodinâmica dos processos de adsorção através da Microcalorimetria de Fluxo (FMC) tem vindo a ser utilizada para obter uma melhor compreensão das forças motrizes, dos mecanismos e das cinéticas envolvidas no processo de adsorção de biomoléculas em diferentes sistemas cromatográficos. Por isso, neste trabalho, usando o FMC como técnica central, pretende-se compreender o efeito do tipo de sal no mecanismo de adsorção da lisozima (PEGuilada e nativa) sobre um suporte cromatográfico de interação hidrofóbica (Toyopearl Butyl–600M). A lisozima foi PEGuilada com mPEG-ALD (20 kDa), mostrando a lisozima PEGuilada em função do tipo de sal, diferentes perfis de adsorção comparativamente com a sua forma nativa.