Ferramentas para o estudo da expressão de genes de proteínas arabinogalactânicas em diferentes células e tecidos do pistilo de Arabidopsis thaliana

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Pereira, Ana Marta Brandão de Almeida Cardoso
Data de Publicação: 2009
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1822/10860
Resumo: Dissertação de mestrado em Fisiologia Molecular de Plantas
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spelling Ferramentas para o estudo da expressão de genes de proteínas arabinogalactânicas em diferentes células e tecidos do pistilo de Arabidopsis thaliana577.2581.1Dissertação de mestrado em Fisiologia Molecular de PlantasNas plantas com flor a fecundação requer o transporte dos gâmetas masculinos até aos óvulos, que surgem profundamente envolvidos pelos tecidos esporofíticos da flor. Este transporte é feito pelo tubo polínico que responde a sinais de direccionamento e cresce através dos diferentes tecidos do pistilo até ao saco embrionário, conduzindo à dupla fecundação. As proteínas arabinogalactânicas (AGPs) são proteínas altamente glicosiladas que poderão estar envolvidas no direccionamento do tubo polínico até ao saco embrionário. Estudos prévios de imunocitoquímica, feitos com diferentes espécies de plantas, mostraram que estas proteínas estão presentes nas células gametofíticas, nas células do tegumento micropilar e nas células do nucelo micropilar. Estas proteínas são óptimas candidatas a moléculas de atracção para o direccionamento do tubo polínico. Neste trabalho foram construídas ferramentas moleculares que permitirão identificar os epítopos destas proteínas previamente localizados por imunocitoquímica no pistilo de Arabidopsis thaliana, determinando a localização celular das AGPs. Para a selecção das AGPs expressas nos tecidos femininos foram analisados dados de experiências de microarrays relativos à expressão das AGPs nas sinergídeas, na célula central e na oosfera. Foram também analisados dados de microarrays de pólen e gâmetas masculinos. De acordo com o padrão de expressão de cada AGP nas células gametofíticas masculinas e femininas e atendendo à similaridade entre as diferentes proteínas, foram seleccionadas 7 AGPs (AGP1, AGP9, AGP10, AGP12, AGP 15, AGP20 e AGP23). Foram obtidas plantas mutantes que expressam a GFP sob o controlo de sequências promotoras destas AGPs para 6 das AGPs seleccionadas inicialmente: AGP1, AGP9, AGP10, AGP12, AGP 15 e AGP23. Estas ferramentas permitirão confirmar a informação obtida a partir das experiências de microarrays bem como determinar que AGPs específicas estão presentes ao longo do trajecto seguido pelo tubo polínico até ao saco embrionário, a nível celular. A partir deste estudo será mais fácil analisar e determinar com uma maior precisão a função das AGPs presentes nos tecidos femininos de Arabidopsis thaliana.Successful fertilization in flowering plants requires sperm cells guidance into the ovules, deeply embedded in the female sporophytic tissues. The pollen tube carries the two sperm cells trough the pistil tissues following guidance cues until it reaches the embryo sac to accomplish double fertilization. Arabinogalactan proteins (AGPs) are highly glycosilated proteins that might be related to pollen tube guidance into the embryo sac. Previous immunolocalization studies with different plant species have shown a specific labelling of AGPs carbohydrate epitopes in the gametophytic cells, the filiform apparatus of the synergids, the integument micropylar cells and the micropylar nucellus. These proteins are excellent candidates for chemoattractants that guide pollen tubes growth. In this study molecular tools were developed, that will allow the specific identification of these proteins epitopes previously identified by immunolocalization studies in Arabidopsis thaliana. Data from microarray experiments using isolated synergids, egg cells and central cells were evaluated in order to identify AGP genes that have the highest expression levels in these cells. These proteins’ expression was also checked in pollen and sperm cells using microarray data. According to the expression pattern of individual AGPs in the female and male gametophytic cells, and to their sequence similarity, 7 AGPs were selected for further analysis (AGP1, AGP9, AGP10, AGP12, AGP15, AGP20 and AGP23). Arabidopsis transgenic plants were generated that express GFP under the control of AGP promoter sequences for 6 (AGP1, AGP9, AGP10, AGP12, AGP15 and AGP23) of the 7 AGPs initially identified. The analysis of these plants will allow the verification of the data obtained from the microarray experiments and the identification of the AGPs present along the pollen tube pathway, as well as will permit the identification of their specific cellular location. The identification of the AGPs present in the female reproductive tissues is of major importance to initiate future function analysis studies regarding this large family of proteins.Tenente, Sílvia Vieira Almeida CoimbraUniversidade do MinhoPereira, Ana Marta Brandão de Almeida Cardoso2009-09-292009-09-29T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/1822/10860porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-07-21T12:25:13Zoai:repositorium.sdum.uminho.pt:1822/10860Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T19:19:24.669645Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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