Avaliação da qualidade das amostras de biópsias líquidas de pacientes com tumores urológicos, colhidas e armazenadas no Biobanco-iMM, CAML

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Rodrigues, Fabiana Cândida da Rocha, 1990-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/40344
Resumo: Tese de mestrado, Oncobiologia, Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina, 2019
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Para isso avaliou-se a estabilidade genómica do DNA armazenado, testando-se a pureza, integridade e a qualidade para aplicações downstream, isolou-se exossomas a partir de soro armazenado, avaliando-se posteriormente a sua qualidade, e testou-se a possibilidade de implementar um serviço de enriquecimento de células tumorais circulantes (CTCs). Da avaliação da estabilidade do DNA apenas a pureza revelou alterações significativas ao longo do tempo de armazenamento, no entanto todas as amostras mantêm-se dentro dos padrões de qualidade, quer sob a forma de DNA quer sobre a forma de ST. O isolamento de exossomas a partir de soro armazenado revelou-se simples, no entanto com alguma contaminação. Os arrays realizados demonstraram a possibilidade de identificar marcadores específicos mesmo após armazenamento. Para a implementação do método de enriquecimento de CTCs testaram-se dois kits da StemCell revelando-se o RosettSep o método com resultados mais puros. A implementação não foi, no entanto, bem-sucedida devido a problemas na deteção das CTCs. A qualidade das amostras é uma das maiores preocupações de quem utiliza biobancos. Com este trabalho foi possível confirmar a qualidade das amostras armazenadas pelo Biobanco na coleção de Tumores, nomeadamente DNA e soro para extração de exossomas. Do ponto de vista científico, com este projeto foi possível criar e disponibilizar à comunidade científica um importante recurso, o banco de exossomas.Biobanco-iMM is a non-profit structure integrated into the Lisbon Academic Medical Center (CAML). Created in 2008 at the Instituto de Medicina Molecular (iMM-JLA), its main objective is to promote biomedical research.1 Oncology is currently a research area in great development, namely in the search for new therapeutic and diagnostic methods. Thus, the development of this project had as objectives evaluate the quality of the existing liquid biopsies in the Tumors’ collection and make available new biological resources, in order to meet the new demands of the scientific community. For this purpose, the genomic stability of the stored DNA was evaluated by testing purity, integrity, and functionality, exosomes were isolated from stored serum samples and its quality was tested, and the possibility of implementing a circulating tumor cells (CTCs) enrichment service was tested. From the evaluation of DNA stability, only purity revealed significant changes over the storage time, however, both the DNA and whole blood samples remained within the quality standards. Isolation of exosomes from stored serum was shown to be simple, however with some contamination. The arrays tested demonstrated the possibility of identifying specific markers even after storage. For the implementation of the CTC enrichment method two Stem Cell kits were tested and the Rosettes proved to be the method with the purest results. The implementation was, however, not successful due to problems in the detection of CTCs. Sample quality is one of the biggest concerns of those who use biobanks. Here, it was possible to confirm the quality of the samples stored by Biobank in the collection of Tumors, namely DNA and serum for extraction of exosomes. From a strictly scientific point of view, with this project, it was possible to create and make available to the scientific community an important resource, the exosome bank.Dias, Sérgio Jerónimo Rodrigues, 1971-Repositório da Universidade de LisboaRodrigues, Fabiana Cândida da Rocha, 1990-2019-11-29T16:06:24Z2019-09-232019-09-23T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/40344TID:202284670porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T16:39:35Zoai:repositorio.ul.pt:10451/40344Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:54:02.108216Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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