O efeito da desintegrina DisBa-01 e do silenciamento da integrina avB3 e na interação de células tumorais e endoteliais in vitro
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Data de Publicação: | 2013 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Texto Completo: | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/5517 |
Resumo: | Metastasis depends on several physiological processes such as cell adhesion, transendothelial cell migration and proliferation. These events are mediated mostly by integrins, which are adhesion receptors present on cell surface and responsible for cellextracellular matrix (ECM) binding. Disintegrins are small proteins from snake venoms, known to inhibit integrin action and therefore metastatic events such as transendothelial cell migration. DisBa-01 is a recombinant RGD disintegrin from Rhinoceraphis alternatus venom gland, with high affinity to the v3 integrin and anti-metastatic activity in vivo. Thereby, the aim of this work was to investigate the effect of v3 integrin in cell transendothelial migration and cell adhesion under flow of MDA-MB- 231 tumor cell line using DisBa-01 as v3 integrin antagonist. The 3 subunit was knockdown by 1uL siRNA/ITGB3 and lipofectamine 2000 (Invitrogen) was used as transfection agent. Additionally cell adhesion under flow, transendothelial migration and time lapse assays were performed using MDA-MB-231 cell line (silenced or not) incubated with 10, 100, 500 and 1000nM of DisBa-01. The 3 integrin knockdown and treatments with DisBa-01 at 500 and 1000nM significantly inhibited cell adhesion as well as the transendothelial migration. The interaction between DisBa-01 and tumor cells was visualized only with 1000nM of disintegrin and not silenced cells. Therefore, it is important using DisBa-01 in different cell lines and in vivo to elucidate more aspects of its effects as anti-metastatic drug. |
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Disintegrins are small proteins from snake venoms, known to inhibit integrin action and therefore metastatic events such as transendothelial cell migration. DisBa-01 is a recombinant RGD disintegrin from Rhinoceraphis alternatus venom gland, with high affinity to the v3 integrin and anti-metastatic activity in vivo. Thereby, the aim of this work was to investigate the effect of v3 integrin in cell transendothelial migration and cell adhesion under flow of MDA-MB- 231 tumor cell line using DisBa-01 as v3 integrin antagonist. The 3 subunit was knockdown by 1uL siRNA/ITGB3 and lipofectamine 2000 (Invitrogen) was used as transfection agent. Additionally cell adhesion under flow, transendothelial migration and time lapse assays were performed using MDA-MB-231 cell line (silenced or not) incubated with 10, 100, 500 and 1000nM of DisBa-01. The 3 integrin knockdown and treatments with DisBa-01 at 500 and 1000nM significantly inhibited cell adhesion as well as the transendothelial migration. The interaction between DisBa-01 and tumor cells was visualized only with 1000nM of disintegrin and not silenced cells. Therefore, it is important using DisBa-01 in different cell lines and in vivo to elucidate more aspects of its effects as anti-metastatic drug.A metástase depende de uma série de processos celulares tais como adesão celular, a migração transendotelial e proliferação em um novo sítio. Esses eventos são mediados principalmente por integrinas, que são receptores de adesão presentes na superfície celular, responsáveis pela ligação entre a célula e a matriz extracelular. Desintegrinas são pequenas proteínas provenientes de venenos de serpentes, conhecidas por inibir a ação de integrinas e, consequentemente, inibem eventos inerentes à cascata metastática como a migração transendotelial. A DisBa-01 é uma desintegrina recombinante com motivo adesivo RGD, proveniente do veneno de Rhinocerophis alternatus, que possui afinidade pela integrina v3 e atividade anti-metastática in vivo. Assim, este trabalho teve como objetivos estudar o efeito da integrina v3 na migração transendotelial e na adesão de células tumorais da linhagem MDA-MB-231 em células endoteliais (HMEC- 1), sob condição de fluxo pela utilização da DisBa-01 como antagonista deste receptor. Foram realizados ensaios de silenciamento gênico com 5nM de siRNA/ITGB3 e lipofectamina 2000 (Invitrogen) como agente transfectante. Também foram realizados ensaios de adesão celular sob condição de fluxo, migração transendotelial e interação através de time lapse com células tumorais da linhagem MDA-MB-231 (silenciadas ou não) tratadas com DisBa-01 nas concentrações de 10, 100, 500 e 1000nM. O silenciamento da integrina 3, assim o tratamento com DisBa-01 nas concentrações de 500 e 1000nM, inibiu a adesão das células MDA-MB-231 às HMEC-1, sob condição de fluxo e a migração transendotelial. A interação entre a DisBa-01 e as células tumorais foi visualizada somente com células não silenciadas e tratadas com 1000nM de desintegrina. Assim, é importante a utilização da DisBa-01 em diferentes linhagens celulares e modelos in vivo para melhor elucidação dos seus efeitos como possível droga anti-metastática.Financiadora de Estudos e Projetosapplication/pdfporUniversidade Federal de São CarlosPrograma de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEvUFSCarBRBiologia molecularDesintegrinaIntegrinaRNA interferenteGenéticaCIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICAO efeito da desintegrina DisBa-01 e do silenciamento da integrina avB3 e na interação de células tumorais e endoteliais in vitroinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis-1-1b61211db-d955-45b7-886e-a0cefb89980finfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFSCARinstname:Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR)instacron:UFSCARORIGINAL5229.pdfapplication/pdf1738509https://repositorio.ufscar.br/bitstream/ufscar/5517/1/5229.pdfb8b65a962afe9919769ce347ef2365b4MD51TEXT5229.pdf.txt5229.pdf.txtExtracted texttext/plain0https://repositorio.ufscar.br/bitstream/ufscar/5517/2/5229.pdf.txtd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD52THUMBNAIL5229.pdf.jpg5229.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5990https://repositorio.ufscar.br/bitstream/ufscar/5517/3/5229.pdf.jpgdcb56999ce2a795557df5fe47b61ed62MD53ufscar/55172023-09-18 18:31:16.038oai:repositorio.ufscar.br:ufscar/5517Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufscar.br/oai/requestopendoar:43222023-09-18T18:31:16Repositório Institucional da UFSCAR - Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR)false |
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