Produção de oligopeptídeos das enzimas Amônia Monooxigenase e Metil Coenzima M Redutase em sistema heterólogo visando à produção de anticorpos específicos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Azevedo, Izabella Monteiro Rizzi de
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Artigo
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/123456789/12165
Resumo: A qualidade funcional do solo depende diretamente da diversidade da sua microbiota. No entanto, não há um consenso quanto ao método que melhor traduza essa diversidade. Grande parte dos microrganismos presentes no solo não pode ser isolado e cultivada pelos métodos de cultivo clássicos. Portanto, métodos indiretos têm sido propostos, baseados na detecção de sequências específicas de DNA ou RNA, ou na atividade de enzimas-chaves que catalisam reações dos ciclos biogeoquímicos. Uma alternativa a esses métodos seria a detecção e quantificação dessas enzimas por métodos imunoquímicos. Para isso, anticorpos específicos precisam ser desenvolvidos. Este trabalho teve como objetivo a clonagem de sequências específicas de genes que codificam duas enzimas-chave dos ciclos biogeoquímicos do nitrogênio (Amônia monooxigenase) e do carbono (Metil coenzima m redutase). Foram utilizadas ferramentas da metagenômica para a clonagem em vetor de expressão dos fragmentos gênicos que codificam as enzimas descritas visando a futura obtenção dos peptídeos correspondentes e eventual produção de anticorpos que permitam detectar e quantificar essas enzimas em amostras de solo.
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Uma alternativa a esses métodos seria a detecção e quantificação dessas enzimas por métodos imunoquímicos. Para isso, anticorpos específicos precisam ser desenvolvidos. Este trabalho teve como objetivo a clonagem de sequências específicas de genes que codificam duas enzimas-chave dos ciclos biogeoquímicos do nitrogênio (Amônia monooxigenase) e do carbono (Metil coenzima m redutase). Foram utilizadas ferramentas da metagenômica para a clonagem em vetor de expressão dos fragmentos gênicos que codificam as enzimas descritas visando a futura obtenção dos peptídeos correspondentes e eventual produção de anticorpos que permitam detectar e quantificar essas enzimas em amostras de solo.The functional quality of the soil depends directly on the diversity of its microbiota. However, there is not a consensus method that best translates this diversity. A large number of micro-organisms in the soil cannot be isolated and cultivated by conventional methods. Therefore, indirect methods have been proposed, based on detection of specific DNA or RNA sequences, and on the activity of key enzymes that catalyze reactions of the biogeochemical cycles. An alternative method would be the detection and quantification of these enzymes by immunochemical methods. For that purpose, specific antibodies must be developed. The main goal of this work was to clone specific sequences of the genes encoding two key enzymes of the nitrogen (Ammonia monooxygenase) and carbon (Methyl Coenzyme m reductase) cycles. Metagenomic tools were used to clone in expression vectors the fragments of these genes to allow the future production of the corresponding peptides which will be used for obtaining specific antibodies for detection and quantification of these enzymes in soil samples.Submitted by Franciene Aguiar (franciene.aguiar@ucb.br) on 2019-07-10T18:58:12Z No. of bitstreams: 1 IzabellaMonteiroRizziDeAzevedoTCCGraduacao2016.pdf: 925690 bytes, checksum: 33c468f8199cee2d5e429f01da846436 (MD5)Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2019-07-12T19:40:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IzabellaMonteiroRizziDeAzevedoTCCGraduacao2016.pdf: 925690 bytes, checksum: 33c468f8199cee2d5e429f01da846436 (MD5)Made available in DSpace on 2019-07-12T19:40:00Z (GMT). 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The functional quality of the soil depends directly on the diversity of its microbiota. However, there is not a consensus method that best translates this diversity. A large number of micro-organisms in the soil cannot be isolated and cultivated by conventional methods. Therefore, indirect methods have been proposed, based on detection of specific DNA or RNA sequences, and on the activity of key enzymes that catalyze reactions of the biogeochemical cycles. An alternative method would be the detection and quantification of these enzymes by immunochemical methods. For that purpose, specific antibodies must be developed. The main goal of this work was to clone specific sequences of the genes encoding two key enzymes of the nitrogen (Ammonia monooxygenase) and carbon (Methyl Coenzyme m reductase) cycles. Metagenomic tools were used to clone in expression vectors the fragments of these genes to allow the future production of the corresponding peptides which will be used for obtaining specific antibodies for detection and quantification of these enzymes in soil samples.
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