Expressão de osmotina de cacau (Theobroma cacao L.) em Escherichia coli

• Autor(a) principal: Rezende, Danielle Rodrigues
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
• Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/123456789/12104
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Ciências biológicas; Moniliophthora perniciosa; Theobroma cacao L.; Vassoura-de-bruxa; Osmotina; Cacau

A cultura do cacau (Theobroma cacao L.) tem grande importância econômica, pois o fruto e os seus derivados são amplamente consumidos em todo o mundo. O cacaueiro é atingido por diversas doenças. No Brasil, a principal é a vassoura-de-bruxa, causada pelo basidiomiceto Moniliophthora perniciosa. Esta doença provocou uma redução drástica na produção de cacau no Brasil, a partir do final da década de 80, e tem sido de difícil controle. O entendimento das bases moleculares da interação planta/patógeno pode auxiliar no desenvolvimento de métodos de controle de doenças. As plantas possuem mecanismos de defesa em resposta à invasão de patógenos ou a fatores abióticos estressantes, como a expressão de proteínas PR (Pathogenesis Related Proteins). As osmotinas são um exemplo deste tipo de proteínas e em algumas plantas apresentam atividade contra fungos e bactérias. O objetivo do presente trabalho foi expressar uma osmotina de T. cacao em sistema heterólogo para futura purificação e avaliação de sua atividade antifúngica. O gene osm1 de T. cacao (Acesso n. AAV34889) foi subclonado no vetor de expressão pQE 30 (Qiagen) em E. coli M15[pREP4]. Para tal, o gene foi amplificado por PCR, utilizando oligonucleotídeos contendo sítios de restrição de BamHI e HindIII, e clonado à jusante do fragmento codante de 6XHis do vetor. A construção foi denominada pQE-osm e a sequência de nucleotídeos demonstrou que osm1 encontra-se na fase de leitura adequada. A expressão da proteína de fusão “histidina-osmotina” foi induzida por adição de IPTG à cultura, seguida por 3h de incubação. Após lise celular, o extrato protéico foi avaliado por SDS-PAGE. A análise revelou uma proteína do tamanho correspondente à fusão (~23 kDa) nos extratos proveniente da cultura induzida, confirmada por imunodetecção com anticorpo anti-His. Desta forma, com este trabalho, foi concluída a primeira etapa para a obtenção de osmotina de cacau para avaliação de atividade antifúngica.