Caracterização de vesículas extracelulares liberadas por mioblastos C2C12 submetidos à simulação in vitro de lesão muscular

• Autor(a) principal: Barroso, Carla Suelen Oliveira
• Data de Publicação: 2015
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
• Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/123456789/8238
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Ciências biológicas; Mioblastos; Lesão muscular; Vesículas extracelulares; Exossomas; miRNAs

Existe um grande interesse no estabelecimento de terapias que proporcionem um processo de reparo muscular mais rápido e eficiente. O potencial de reparo do músculo esquelético é mediado pela ativação de células satélites, conhecidas como mioblastos. Um bom modelo in vitro de estudo da proliferação e diferenciação (miogênese) dessas células tem sido a linhagem celular murina C2C12. Pesquisas recentes demonstram que os mioblastos liberam, além de fatores regulatórios, vesículas extracelulares (EVs) capazes de atuar em processos de comunicação intercelular carregando proteínas, DNA e miRNAs às células-alvo. A classe mais comum de EVs são os chamados exossomas de tamanho entre 30 e 150 nm, originados pela via endossomal. O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto da simulação de lesão muscular sobre as EVs liberadas por mioblastos C2C12, durante a etapa de proliferação. Para este fim, os mioblastos foram cultivados sob condição controle de suprimento nutricional (10% de SFB) e sob condição de estresse celular (5% de SFB). A proliferação celular foi avaliada após 24 h e 48 h de incubação, bem como o marcador miogênico MyoD. As EVs foram purificadas por centrifugação diferencial e caracterizadas por resistência de pulso e microscopia eletrônica de transmissão. Os miRNAs miR-206 e miR-133a foram quantificados por qPCR. Os resultados mostraram que não houve alteração significativa na expressão de MyoD entre as duas condições, tampouco na morfologia ou confluência celular. Foi observada no pool a distribuição de vesículas de tamanho inferior a 100 nm, com formato esférico típico de exossomas. As maiores concentrações de partículas por mL e de partículas totais foram registradas para a condição de lesão muscular. Além disso, foram verificados baixos níveis do miR-133a, em decorrência do final da proliferação, e níveis aumentados do miR-206, devido à preparação para a diferenciação. O miR-206 apresentou maior regulação positiva na condição de lesão muscular, sendo possivelmente um bom indicador do estresse celular.