Identificação individual e discriminação de espécies na coleção de germoplasma de Eucalyptus da Universidade Católica de Brasilia (UCB) com base em marcadores microssatélites

• Autor(a) principal: Machado, Jefferson Barros
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
• Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/123456789/12107
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Ciências biológicas; Microssatélites; Eucalipto

Dentre as muitas atividades de sucesso do setor empresarial brasileiro as florestas comerciais de Eucalipto destacam-se por estar em um continuado sucesso e crescimento, contribuindo hoje substancialmente para o PIB nacional. Todo o setor florestal no Brasil contribui com 4% do PIB e os produtos derivados de plantios de Eucalipto perfazem uma parcela significativa deste percentual. Além disso, o Eucalipto é um dos grandes candidatos no esforço internacional de seqüestro de carbono e preservação de florestas nativas, pois diminui a pressão sobre estas gerando produtos de grande importância econômica. No entanto, as áreas disponíveis para florestas industriais serão limitadas nas próximas décadas, fazendo do melhoramento genético uma estratégia para a sustentabilidade de empreendimentos de base florestal. Uma coleção de germoplasma de Eucalipto foi montada na UCB para auxiliar em futuros estudos genômicos. Mudas de Eucalipto , algumas delas clonais, provenientes de várias empresas plantadoras, foram enviadas para fazer parte desta coleção. Porém, algumas plantas foram enviadas sem identificação, com identificações confusas ou a identificação foi perdida durante o plantio. Este trabalho objetivou assim, utilizar a análise genética com marcadores moleculares para identificar as plantas desta coleção e com isso refazer um mapa (croqui) que tornasse possível a identificação rápida desses indivíduos. Para isso, o DNA foi extraído a partir do tecido foliar de cada individuo utilizando-se o método padrão de extração baseado no detergente CTAB e quantificado em gel de agarose 1,5% corado com brometo de etídeo. Para a amplificação dos locos microssatélites foram montados sistemas multiplex somando um total de 15 locos. As amostras foram submetidas à eletroforese capilar em um seqüenciador automático ABI3100 (Applied Biosystems) e os dados coletados e interpretados utilizando os softwares GenScan e Genotyper. Os dados obtidos foram analisados no software Allelobin visando obtê-los em classes ajustadas para a unidade de pares de bases para a realização de análises estatísticas subseqüentes. A probabilidade de identidade para cada loco e combinada foi calculada com auxilio do software GeneAlex 6.0. Para análise de distância genética os dados foram submetidos a uma análise de similaridade genética utilizando o recíproco da distância baseada no compartilhamento de alelos. Em seguida essa matriz de distâncias foi transformada em matriz de similaridade sendo então submetida a uma análise de agrupamento por meio dos softwares NTSys utilizando-se o algoritmo UPGMA. Por fim foi feita uma análise de estrutura de populações para investigar os padrões de estruturação genética existente no Banco de germopalsma, utilizando o programa STRUCTURE. Na análise de toda a coleção conjuntamente foi observada uma diferença significativa entre a Heterozigosidade observada e esperada. Todos os locos utilizados na análise viii apresentaram um elevado polimorfismo, apresentando uma média de 18 alelos demonstrando o grande poder de identificação individual desses microssatelites. Foi possível assim reconstruir o mapa de campo e identificar com alta confiabilidade indivíduos geneticamente idênticos (clones), assim como diferenciar indivíduos geneticamente não relacionados. Foram ainda identificados os locos mais informativos, podendo assim, reduzir a quantidade de locos utilizados em trabalhos futuros mantendo confiabilidade estatística semelhante nas analises.