Clonagem do gene codificador do peptídeo antimicrobiano Clavanina MO derivado de Styela clava para a expressão transiente em folhas de Nicotiana benthamiana

• Autor(a) principal: Costa, Lorena de Loiola
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
• Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/123456789/12098
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Ciências biológicas; Clavanina MO; Peptídeos antimicrobianos

Historicamente, os microrganismos patogênicos oportunistas representam o maior risco à saúde para indivíduos cujo sistema imune esteja comprometido por uma doença. Nesse contexto, peptídeos antimicrobianos (PAMs) que são pequenas moléculas produzidas virtualmente por todos os organismos vivos se apresentam como moléculas promissoras a complementarem a ação de drogas convencionais no combate aos microrganismos patogênicos. O PAM marinho Clavanina Modificada (Clavanina MO), derivado do tunicado marinho Styela clava, apresenta atividade contra bactérias patogênicas Gram-positivas (incluindo cepas multirresistentes de Staphylococcus aureus) e Gram-negativas. A partir da primeira proteína farmacêutica expressa em plantas, o hormônio do crescimento humano, as plantas têm sido usadas como sistema de expressão para anticorpos, enzimas, polímeros entre outras proteínas. Recentemente, o sistema de expressão transiente em Nicotiana benthamiana (N. benthamiana) se mostrou promissor para a biossíntese rápida e escalonável de PAMs nas folhas da planta. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho é subclonar o gene codificador do peptídeo antimicrobiano Clavanina MO no vetor de clonagem pGEM-T Easy® (Promega) para clonagem no vetor de expressão e futura expressão heteróloga transiente em folhas de plantas de N. benthamiana. Para isso, o gene codificador da Clavanina MO foi amplificado utilizando oligonucleotideos iniciadores específicos, os amplicons gerados após serem clivados com endonuclease de restrição (BsaI) foram então ligados ao vetor de clonagem pGEM-T Easy® (Promega) com utilização de T4 DNA ligase. Após a transformação de células eletrocompetentes de E.coli (XL1-BLUE) com o vetor recombinante, o DNA plasmidial foi extraído por lise alcalina e posteriormente checado por digestão com endonuclease de restrição e sequenciamento. A partir dos resultados obtidos pode-se inferir que o vetor pGEM-T Easy® é eficiente para a subclonagem do gene codificador do peptídeo antimicrobiano Clavanina MO e futura expressão heteróloga transiente em folhas de N. benthamiana.