Construção de um vetor binário com genes marcadores para transformação genética de monocotiledôneas

• Autor(a) principal: Barbosa, Renata Pinheiro
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
• Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/123456789/12149
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Ciências biológicas; Genética

Brachiaria é uma gramínea proveniente da África e com grande importância econômica. O gênero foi introduzido na América do Sul no século XVIII, tendo se adaptado no Brasil, a diferentes tipos de solos e condições climáticas. A demanda do uso da Brachiaria como pastagem, é devida não só por sua excelente adaptação a solos pobres e ácidos, como também pela resistência à seca, a pragas e qualidade nutricional. Uma das limitações do melhoramento da Brachiaria é devido a presença da apomixia, modo de reprodução no qual não há a fusão dos gametas, impedindo a variabilidade genética, gerando clones idênticos a planta mãe através de sementes. O estudo da apomixia abre duas frentes estratégicas, de um lado a quebra ou silenciamento da apomixia em plantas apomíticas naturais como a B. brizantha, que possibilitará o uso dessas plantas em cruzamentos no programa de melhoramento. Por outro lado, poderá ser vislumbrada a transferência deste tipo de reprodução para fixação de híbridos de interesse agronômico. A transformação genética amplia a possibilidade de introdução de genes de interesse e também possibilita o estudo da expressão de genes que podem estar envolvidos com a apomixia. O objetivo deste trabalho foi construir dois vetores binários, para que seja possível realizar a transformação de Brachiaria e de outras monocotiledôneas via Agrobacterium tumefaciens. O promotor de Ubiquitina1 de milho retirado do plasmídio pAHC27 foi clonado nos vetores pGPro1 ou pGpro2 no sítio de PstI, tendo sido obtidos um clone de cada vetor na orientação correta. Além dos genes marcadores repórteres gus e gfp os vetores possuem o gene marcador de seleção hptII, que confere resistência ao antibiótico higromicina e é dirigido pelo promotor pAct1 de arroz. Foi realizado também um tratamento de choque térmico em sementes maduras de braquiária visando à redução de contaminação das sementes, e foram testados dois meios de cultura para indução de calos embriogênicos e suspensões celulares. Os vetores pGPro 1 e 2 com pUbi1-gus/gfp serão posteriormente bombardeados em suspensões celulares de B. brizantha para checar o correto funcionamento dos mesmos. Em seguida, os vetores serão introduzidos em cepas de Agrobacterium tumefaciens para realização de agroinfiltração em folhas de B. brizantha e Oryza sativa, assim como, a transformação estável por co-cultura.