Identificação molecular de fungos causadores de onicomicose em pacientes atendidos na rede pública de saúde do Distrito Federal

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Sousa, Leonardo de
Data de Publicação: 2017
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/123456789/8637
Resumo: Onicomicose é uma infecção fúngica que corresponde a 50% das onicopatias e sua incidência aumentou nas últimas décadas. Seu diagnóstico por meio de técnicas convencionais possui limitações, o que pode interferir no tratamento mais adequado. Sendo assim, este projeto de pesquisa tem como objetivo realizar por meio da técnica PCR a identificação de fungos causadores de onicomicose em pacientes atendidos na Rede Pública de Saúde do Distrito Federal. Para isso, 100 amostras de unhas de pacientes com diagnóstico clínico de onicomicose foram coletadas, tiveram o DNA extraído e quantificado. Todavia, o gene ITS1 e ITS4 de 28 delas foram amplificados por PCR e o DNA amplificado foi purificado das bandas do gel de agarose. Contudo, 22 amostras foram sequenciadas, analisadas e alinhadas com sequências depositadas nas bases de dados online NCBI GenBank, MycoBank, Institut Pasteur FungiBank e International Society for Human and Animal Mycology ITS. Esse alinhamento resultou em 5 amostras cuja identificação apresentou correlação significativa entre os valores de score e e-evalue. Fungos filamentosos não dermatófitos foi o grupo fúngico com o maior número de espécies, seguido por leveduras de Candida. Ao contrário do esperado, nenhuma espécie de dermatófito foi identificada dentre as sequências analisadas. Esses resultados indicam que a PCR é promissora no diagnostico de onicomicose e deve-se pensar na sua associação com os métodos convencionais para validação da identificação.
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Para isso, 100 amostras de unhas de pacientes com diagnóstico clínico de onicomicose foram coletadas, tiveram o DNA extraído e quantificado. Todavia, o gene ITS1 e ITS4 de 28 delas foram amplificados por PCR e o DNA amplificado foi purificado das bandas do gel de agarose. Contudo, 22 amostras foram sequenciadas, analisadas e alinhadas com sequências depositadas nas bases de dados online NCBI GenBank, MycoBank, Institut Pasteur FungiBank e International Society for Human and Animal Mycology ITS. Esse alinhamento resultou em 5 amostras cuja identificação apresentou correlação significativa entre os valores de score e e-evalue. Fungos filamentosos não dermatófitos foi o grupo fúngico com o maior número de espécies, seguido por leveduras de Candida. Ao contrário do esperado, nenhuma espécie de dermatófito foi identificada dentre as sequências analisadas. Esses resultados indicam que a PCR é promissora no diagnostico de onicomicose e deve-se pensar na sua associação com os métodos convencionais para validação da identificação.Onychomycosis is a fungal infection that corresponds to 50% of onicopathies and its incidence has increased in the last decades. Its diagnosis through conventional techniques has limitations, which may interfere in the most appropriate treatment. Therefore, this research project aims to perform, through the PCR technique, the identification of fungi that cause onychomycosis in patients attended in the Public Health Network of the Distrito Federal. For this, 100 nail samples from patients with clinical diagnosis of onychomycosis were collected, the DNA extracted and quantified. However, the ITS1 and ITS4 gene from 28 of them were amplified by PCR and the amplified DNA was purified from the agarose gel bands. However, 22 samples were sequenced, analyzed and aligned with sequences deposited in the online databases NCBI GenBank, MycoBank, Institut Pasteur FungiBank and International Society for Human and Animal Mycology ITS. This alignment resulted in 5 samples whose identification showed a significant correlation between the values of score and e-evalue. Non-dermatophyte filamentous fungi were the fungal group with the highest number of species, followed by yeasts of Candida. Contrary to expectations, no dermatophytes were identified. These results indicate that the PCR is promising in the diagnosis of onychomycosis and its association with conventional methods for validation of identification should be considered.Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-07-05T17:57:40Z No. of bitstreams: 1 LeonardodeSouzaTCCGraduacaoParcial2017.pdf: 334526 bytes, checksum: 3860a5b5df9cc78be9752fab8d58dfe6 (MD5)Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-07-05T17:58:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LeonardodeSouzaTCCGraduacaoParcial2017.pdf: 334526 bytes, checksum: 3860a5b5df9cc78be9752fab8d58dfe6 (MD5)Made available in DSpace on 2017-07-05T17:58:02Z (GMT). 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Onychomycosis is a fungal infection that corresponds to 50% of onicopathies and its incidence has increased in the last decades. Its diagnosis through conventional techniques has limitations, which may interfere in the most appropriate treatment. Therefore, this research project aims to perform, through the PCR technique, the identification of fungi that cause onychomycosis in patients attended in the Public Health Network of the Distrito Federal. For this, 100 nail samples from patients with clinical diagnosis of onychomycosis were collected, the DNA extracted and quantified. However, the ITS1 and ITS4 gene from 28 of them were amplified by PCR and the amplified DNA was purified from the agarose gel bands. However, 22 samples were sequenced, analyzed and aligned with sequences deposited in the online databases NCBI GenBank, MycoBank, Institut Pasteur FungiBank and International Society for Human and Animal Mycology ITS. This alignment resulted in 5 samples whose identification showed a significant correlation between the values of score and e-evalue. Non-dermatophyte filamentous fungi were the fungal group with the highest number of species, followed by yeasts of Candida. Contrary to expectations, no dermatophytes were identified. These results indicate that the PCR is promising in the diagnosis of onychomycosis and its association with conventional methods for validation of identification should be considered.
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