Otimização do sistema de multiplicação in vitro por meio do método Scalp e indução do aumento da variabilidade genética pelo uso de mutagênico químico e da transformação genética em bananeira (Musa spp., AAB)
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Data de Publicação: | 2017 |
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Resumo: | Banana (Musa spp.) is considered one of the most important fruits in world trade due to its nutritional and economic potential.But although there is a large number varieties on the market, the banana is still affected by many diseases.The application of the method of crosses in this species is very difficult because the majority of cultivated varieties is triploid presenting low fertility. In this case, it is necessary to use biotechnology and its tools applied to non-conventional genetic improvement to develop new varieties that have resistance to their different types of pathogens.This work was carried out with the objective of adapting the technique of obtaining embryogeniccallus of banana by means of the Scalp method in cultivars Brazilian Maçã and Pacovan, adjusting the processes of induction of meristematic structures and multiplication of shoots and induce increased genetic variability by in vitro mutagenesis using the chemical agent ethylmethanesulfonate and, of the genetic transformation by the bombardment of microparticles. Was evaluated the callus formation, the effect of mutagenic in the in vitro cultivation of shoots and the effects of genetic transformation on shoot resistance in selection medium containing the herbicide Imazapyr. The results showed that the merystematic structures obtained have the capacity to origin callus with only one month of cultivation, and both cultivars developed friable callus with average values above 90%.The efficiency of this method was evidenced by the high capacity of induction of friable callus in the two evaluated cultivars but also by the rapidity in the process of obtaining calluses, being the first study of adaptation of the methodology for Brazilian banana cultivars.On the other hand, the evaluation of the mutation induction allowed to conclude that the survival and the capacity of bud formation decreased as a function of the increase of the concentration and the immersion time in the ethylmethanesulfonate.The surviving plants underwent a sorting with the fusaric acid selective agent in which it was possible to regenerate in vitro plants of the cultivars submitted to treatment with the mutagen and to select possible mutants with fusaric acid resistance for cultivarsMaçã and Pacovan.And the genetic transformation method proved efficient in the regeneration of shoots resulting in high values of survival and multiplication, where possible transgenic plants of banana cv. Maçã were obtained after selection of resistance to the herbicide.Therefore, it is concluded that all the material produced, both in the mutagenic phase and in the genetic transformation, presents a greater genetic variability potentially applicable to the banana improvement. |
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Melo, Natoniel Franklin de4188966548707195728439http://lattes.cnpq.br/5095403771363634Oliveira, Maria Maiany de2017-10-05T21:58:20Z2017-03-29OLIVEIRA, Maria Maiany de. Otimização do sistema de multiplicação in vitro por meio do método Scalp e indução do aumento da variabilidade genética pelo uso de mutagênico químico e da transformação genética em bananeira (Musa spp., AAB). 2017. 90 f. Tese (Doutorado Acadêmico em Recursos Genéticos Vegetais)- Universidade Estadual de Feira de Santana, Feira de Santana, 2017.http://localhost:8080/tede/handle/tede/508Banana (Musa spp.) is considered one of the most important fruits in world trade due to its nutritional and economic potential.But although there is a large number varieties on the market, the banana is still affected by many diseases.The application of the method of crosses in this species is very difficult because the majority of cultivated varieties is triploid presenting low fertility. In this case, it is necessary to use biotechnology and its tools applied to non-conventional genetic improvement to develop new varieties that have resistance to their different types of pathogens.This work was carried out with the objective of adapting the technique of obtaining embryogeniccallus of banana by means of the Scalp method in cultivars Brazilian Maçã and Pacovan, adjusting the processes of induction of meristematic structures and multiplication of shoots and induce increased genetic variability by in vitro mutagenesis using the chemical agent ethylmethanesulfonate and, of the genetic transformation by the bombardment of microparticles. Was evaluated the callus formation, the effect of mutagenic in the in vitro cultivation of shoots and the effects of genetic transformation on shoot resistance in selection medium containing the herbicide Imazapyr. The results showed that the merystematic structures obtained have the capacity to origin callus with only one month of cultivation, and both cultivars developed friable callus with average values above 90%.The efficiency of this method was evidenced by the high capacity of induction of friable callus in the two evaluated cultivars but also by the rapidity in the process of obtaining calluses, being the first study of adaptation of the methodology for Brazilian banana cultivars.On the other hand, the evaluation of the mutation induction allowed to conclude that the survival and the capacity of bud formation decreased as a function of the increase of the concentration and the immersion time in the ethylmethanesulfonate.The surviving plants underwent a sorting with the fusaric acid selective agent in which it was possible to regenerate in vitro plants of the cultivars submitted to treatment with the mutagen and to select possible mutants with fusaric acid resistance for cultivarsMaçã and Pacovan.And the genetic transformation method proved efficient in the regeneration of shoots resulting in high values of survival and multiplication, where possible transgenic plants of banana cv. Maçã were obtained after selection of resistance to the herbicide.Therefore, it is concluded that all the material produced, both in the mutagenic phase and in the genetic transformation, presents a greater genetic variability potentially applicable to the banana improvement.A banana (Musa spp.) é considerada um dos mais importantes frutos no comércio mundial em virtude seu potencial nutritivo e econômico. Mas, apesar de existir um grande número de variedades no mercado, a bananeira ainda é acometida por muitas doenças. A aplicação do método de cruzamentos nesta espécie é muito difícil, pois a maioria das variedades cultivadas é triploide apresentando baixa fertilidade. Nesse caso, faz-se necessário o uso da biotecnologia e de suas ferramentas aplicadas ao melhoramento genético não convencional para desenvolver novas variedades que tenham resistência aos seus diferentes tipos de patógenos. Este trabalho foi realizado com os objetivos de adaptar a técnica de obtenção de calos embriogênicos de bananeira por meio do método Scalp nas cvs. Maçã e Pacovan, ajustando os processos de indução de estruturas polimeristemáticas ede multiplicação de brotos e induzir o aumento da variabilidade genética por meio da mutagênese in vitro com o uso do agente químico etilmetanosulfonato e, da transformação genética pelo bombardeamento de micropartículas.Foram avaliados os calos formados, o efeito do mutagênico no cultivo in vitro de brotos e, os efeitos da transformação genética quanto à resistência dos brotos em meio de seleção contendo o herbicida Imazapyr. Os resultados mostraram que as estruturas polimeristemáticas obtidas têm capacidade de originar calos com apenas um mês de cultivo e, ambas as cultivares desenvolveram calos friáveis com rendimentos médios acima de 90%. A eficiência desse método foi comprovada pela alta capacidade de indução de calos friáveis nas duas cultivares avaliadas, como também pela rapidez no processo de obtenção de calos, sendo este o primeiro estudo de adaptação da metodologia para as cultivares Maçã e Pacovan. Por outro lado, a avaliação da indução de mutação permitiu concluir que a sobrevivência e a capacidade de formação de brotos diminuíram em função do aumento da concentração e do tempo de imersão no etilmetanosulfonato. As plantas sobreviventes passaram por uma triagem com o agente seletivo ácido fusárico na qual, foi possível regenerar plantas in vitro das cultivares submetidas ao tratamento com o mutagênico e selecionar possíveis mutantes com resistência ao ácido fusárico para as cvs. Maçã e Pacovan. O método da transformação genética mostrou-se eficiente na regeneração dos brotos resultando em altos valores de sobrevivência e multiplicação, onde possíveis plantas transgênicas de bananeira cv. Maçã foram obtidas, após a seleção de resistência ao herbicida. Portanto, conclui-se que todo material produzido, tanto na fase mutagênica quanto na transformação genética, apresenta uma maior variabilidade genética potencialmente aplicável ao melhoramento da bananeira.Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2017-10-05T21:58:20Z No. of bitstreams: 1 TESE- MARIA MAIANY DE OLIVEIRA.pdf: 1486275 bytes, checksum: 077fcda867394bf1737e7758d79af6a2 (MD5)Made available in DSpace on 2017-10-05T21:58:20Z (GMT). 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