Prospecção genética de bactérias isoladas de nódulos de mucuna (Mucuna aterrima) do cerrado goiano

• Autor(a) principal: Oliveira, Ailton Junio Cantuaria de
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital Brasileira de Teses e Dissertações da UEG
• Texto Completo: http://www.bdtd.ueg.br/handle/tede/617
• topic: Genoma; Mucuna; Bactérias endofíticas; Inoculantes e simbiose; Genome; Mucuna; Endophytic bacteria and symbiosis; CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA; QUIMICA::FISICO-QUIMICA

A mucuna é uma leguminosausada como adubo verde, no período de entressafras, em sistemas agrícolas. Sua simbiose com microrganismos capazes de realizar fixação biológica de nitrogênio (FBN) é uma forma alternativa, e vantajosa de promoção de crescimento e melhoramento da qualidade do solo. Este trabalho objetiva realizar a caracterização da estrutura genômica por métodos moleculares de 24 bactérias obtidas dos nódulos deraízes da mucuna (Mucuna aterrima) cultivadas em três regiões do estado de Goiás: Rio Verde, Porangatú e Santo Antônio de Goiás. A caracterização molecularfoi baseada na separação do DNA genomico pela técnica de PFGE (Eletroforese em Gel de Campo Pulsado) e pela amplificação de regiões conservadas e não conservadas do genoma pela PCR(Reação em Cadeia da Polimerase). Também foi realizado o sequenciamento da região 16S rRNA e sua restrição com a endonuclease HaeIII(ARDRA). Os resultados obtidos nos ensaios foram tratados pela análise de similaridade utilizando o coeficiente de Jaccard e o algoritmo UPGMA, com construção de dendrogramas de similaridade, a fim de estimar a relação filogenética dos isolados. A análise pelo PFGE revelou a presença de material genético circular de alto peso molecular junto a um replicon de peso 1,2 Mb para maioria dos isolados. As regiões IRS 16-23S rRNA e REP foram consideradas de alto valor discriminatório a nível intraespécies. O estudo das regiões housekeeping (glnII e atpD) mostraram-se inadequando para o teste de MLSA (Análise de Sequências Multilocus), contudo podem ser empregados em estudo filogenéticos de polimorfismo, assim como o gene melA. O gene nifH foi exibido para seis isolados de mucuna. Já o gene nodC não foi evidenciado para nenhum isolado. A região 16S rRNA apresentou fragmentos com 1,5 kb para todos os isolados e sua restrição com a enzima HaeIII apresentou um bom agrupamento para separação filogenética. Os dados do sequenciamento foram comparados com sequencias de banco de dados do NCBI para obtenção da identificação das bactérias estudadas. Foram identificados 11 isolados com similaridade acima de 91% sendo consideradas dos gênerosEnterobacter, Bacillus e Stenotrophomonas. As elucidações dessas características genotípicas visam fornecer subsídio para o entendimentoda relação entre bactérias isoladas dos nódulos e plantas hospedeiras, assim como investigar a dinâmica da estrutura genômica destes procariotos e a diversidade das bactérias associadas a mucuna. O estudo ainda pode auxiliar na estratégia de seleção de grupos de bactérias para serem utilizadas como inoculantes para a cultura da mucuna.