Extração e amplificação de DNA de bactérias em Dispositivos microfluídicos descartáveis de poliéstertoner (PT)

• Autor(a) principal: Santos, Fernando Machado dos
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital Brasileira de Teses e Dissertações da UEG
• Texto Completo: http://www.bdtd.ueg.br/handle/tede/247
• topic: Microfluídica; Análise genética; Poliéster-toner; Microfluidics, and; Genetic analysis; Polyester-toner; CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA

A microfluídica possibilita a manipulação de pequenos volumes de fluidos em canais com dimensões micrométricas proporcionando diversas vantagens analíticas e aplicações em diferentes áreas do conhecimento. A evolução das análises envolvendo DNA em microescala busca revolucionar as técnicas analíticas e as manipulações convencionais de laboratório. No presente trabalho, foram construídos dispositivos microfluídicos de poliéster-toner (PT) para realizar a extração dinâmica de DNA em fase sólida (dSPE) com partículas de sílica magnéticas e a amplificação de longos segmentos de DNA através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) das bactérias Azospirillum brasilense AbV5 e Escherichia coli BL21 transformada com plasmídeo pGEX-4T-3. Por meio da quantificação das frações eluídas na extração da DNA foram elaborados os gráficos do perfil de eluição para avaliação da quantidade de DNA extraído antes e após a agitação das partículas magnéticas de sílica e o cálculo da eficiência de extração. A amplificação de DNA pela PCR foi realizada em sistema homemade por meio de aquecimento mediado por radiação infravermelha (IV) sendo a temperatura controlada por um termopar com o auxílio do software LabVIEW. A extração de DNA realizada em microchips de PT mostrou-se um método rápido, com alta eficiência de extração e pureza, podendo ser amplificado posteriormente pela PCR. Foram obtidos produtos amplificados pela PCR em dispositivos microfluídicos de PT utilizando o par de primer Y1 e Y3 corresponde ao gene 16S rDNA do DNA da bactéria A. brasilense AbV5 e o par de primer blaTEM forward e blaTEM reverse correspondente ao gene codificador de resistência a antibióticos do DNA da bactéria E. coli BL21. Os produtos amplificados foram separados por eletroforese no Bioanalyzer apresentando picos de fluorescência correspondentes a 1500 e 1150 pares de bases para as bactérias A. brasilense AbV5 e E. coli BL21, respectivamente. Os resultados demonstraram pela primeira vez o sucesso do uso de microchips de PT para as análises de DNA de bactérias.