Métodos de cultivo e criopreservação do tecido ovariano bovino

• Autor(a) principal: Silva, Camila Bizarro da
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
• Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/8965
• topic: Bovino; Reprodução; Folículos ovarianos; Reprodução animal; Cattle - Reproduction; Ovarian follicles; Animal reproduction

Resumo: Um grande número de biotecnologias têm sido desenvolvidas para preservação da fertilidade humana e animal, principalmente referente ao crescimento e preservação folicular Deste modo, os avanços nas biotécnicas de cultivo in vitro e criopreservação de folículos pré-antrais são fundamentais para investigação da foliculogênese e no aporte do tratamento de doenças reprodutivas O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma estratégia viável de cultivo in vitro de folículos pré-antrais e um protocolo eficiente de criopreservação de tecido ovariano de fêmeas bovinas para incrementar a eficie^ncia reprodutiva, atrave´s da: I) Avaliação do efeito de diferentes métodos de cultivo in vitro e II) Determinação da melhor concentração de dimetilsulfóxido (DMSO) ao protocolo de vitrificação do tecido ovariano de bovinos No experimento I, os fragmentos foram cultivados in vitro e distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: i) cultivo padrão, diretamente em placa de cultivo (2D), ii) cultivo suporte, sobre uma monocamada de gel de agarose (2D); iii) cultivo imerso, sobre gel de agarose imerso no meio (2D) e; iv) cultivo Millicell-Biopore (3D) Os dados foram submetidos aos testes de ANOVA (p=,5) Foram avaliados 133 folículos pré-antrais na análise morfológica Os fragmentos cultivados sobre o suporte de gel de agarose apresentaram uma maior proporção de folículos íntegros (75,3%; 113/15) em comparação aos demais grupos (p<,5) aos seis dias de cultivo, enquanto aos quatorze dias, os cultivos padrão, suporte e imerso possibilitaram um maior percentual de folículos morfologicamente íntegros: 54,7% (82/15), 58% (87/15) e 547% (82/15), respectivamente, quando em comparação ao cultivo Millicell (35,3%; 53/15; p>,5) Os níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) e capacidade antioxidante das amostras cultivadas pelos quatro métodos apresentaram redução dos níveis de ânion superóxido e da capacidade antioxidante quando comparadas ao grupo controle não cultivado Para o experimento II o córtex ovariano foi fragmentado e dividido em um tratamento controle (não vitrificado) e três grupos vitrificados: I) 1M de DMSO; II) 1,5M de DMSO e III) 3M de DMSO Os fragmentos ovarianos ficaram vitrificados durante 7 dias e posteriormente analisados por histologia, presença de espécie reativas de oxigênio e reativação e crescimento folicular (cultivo in vitro) Imediatamente após a vitrificação/aquecimento, os fragmentos ovarianos criopreservados em 1M, 1,5M e 3M de DMSO mostraram porcentagens semelhantes (p>,5) de folículos íntegros Entretanto, apenas a concentração de 3M de DMSO diferiu do controle não vitrificado (33,9% e 81,3%, respectivamente; p<,5) A análise de radicais livres e a capacidade antioxidante demonstrou a concentração de 3M de DMSO apresentou maior concentração de EROs quando comparada a demais concentrações de DMSO (p<,5) Após o cultivo in vitro dos fragmentos vitrificados/aquecidos a concentração de 1M de DMSO apresentou maiores porcentagens de folículos morfologicamente íntegros que as demais contrações (47,7%; p<,5) Em conclusão, o cultivo suporte proporcionou a manutenção da integridade morfológica, maiores diâmetros e capacidade antioxidante dos folículos pré-antrais Ainda, podemos sugerir que os folículos pré-antrais bovinos podem ser criopreservados in situ com maior eficiciência em 1M de DMSO