Conjugação in vitro de Enterococcus sp. resistente à vancomicina

• Autor(a) principal: Terra, Márcia Regina
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
• Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/15411
• topic: Enterococcus; Drogas; Resistência em microorganismos; Genética microbiana; Conjugação (Biologia); Drug resistance in micro-organisms; Conjugation (Biology); Microbial genetics

Resumo: O gênero Enterococcus tem grande importância na Microbiologia de Alimentos devido a sua utilização como probiótico e seu uso como cultura iniciadora No entanto, tem emergido como importante patógeno de infecções nosocomiais A resistência de Enterococcus à maioria dos antimicrobianos de escolha e também a vancomicina tem sido relatado como um problema de saúde mundial Enterococcus possui à habilidade natural de adquirir resistência a diferentes antimicrobianos por meio de transferência horizontal de genes, principalmente pela obtenção de plasmídeos de resistência via processo conjugativo, que conferem a capacidade de expressar fenótipos de resistência a diversas drogas Um dos principais genes de resistância a vancomicina detectados em Enterococcus é o gene vanA com isso o objetivo do presente estudo foi avaliar a transferência do gene vanA, via processo conjugativo, entre isolados de E faecium e E faecalis, em meio de cultura e em leite No presente estudo foi determinado o perfil genotípico e fenotípico de 3 isolados de Enterococcus spp por meio de reação em cadeia de polimerase (PCR) com os oligonucleotídeo iniciadores vanA, tetL, gelE e cpd e pela técnica de Concentração Inibitória Mínima(CIM) A transferência do gene vanA in vitro foi demonstrada em caldo Mueller Hinton e em leite reconstituído na razão de 1:1(doador: receptor), seguido de incubação a 37ºC, a 8 rpm, por 6 horas A cada 2 horas 1µl do co-cultivo foi semeado em ágar Mueller Hinton contendo Tetraciclina (16µg/mL) e Vancomicina (32µg/mL), e as placas foram incubadas a 37ºC por 18 horas, com posterior contagem de UFC/mL A frequência de transconjugantes foi obtida pela razão do número de transconjugantes pelo número de células doadoras utilizadas no co-cultivo A estabilidade plasmidial e a confirmação dos transconjugantes foi realizada PCR com os oligonucleotídios citados acima A mesma metodologia foi realizada com doador morto por aquecimento A análise do perfil genotípico e fenotípico nos proporcionou formar 3 pares, sendo 1 isolados doadores e 3 isolados receptores Foram obtidos transconjugantes do gene vanA em todos os pares e tempos testados No experimento de conjugação do gene vanA em MH a maior frequência obtida foi de 5,5x15 e a menor foi de ,3x15 UFC/mL, com duas horas de co-cultivo Não obtivemos transconjugantes com a técnica doador morto, excluindo assim o processo de transformação como método de transferência do gene Foi observado 1% de estabilidade com todos os pares A eficiência de Enterococcus em transferir o gene vanA leva a disseminação deste gene de resistência o que pode resultar no aumento da frequência de Enterococcus spp resistente à vancomicina, limitando cada vez mais as alternativas de terapêutica