Expressão e caracterização da região C-terminal da subunidade Rrp44 do complexo exossoma de Trypanosoma cruzi

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Pollyana Myrella Capela dos
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/14060
Resumo: Resumo: Trypanosoma cruzi é um parasito heteroxênico com um complexo ciclo biológico envolvendo hospedeiros vertebrados e invertebrados Ao contrário de outros eucariotos, seus genes estão organizados em unidades policistrônicas sem promotores típicos para a RNA polimerase II, a transcrição ocorre de forma contínua e a regulação da expressão gênica quase que totalmente, em nível pós-transcricional Entre as estruturas responsáveis pela regulação pós-transcricional nesses parasitos, encontra-se o exossoma, um complexo multiprotéico com capacidade de degradação 3’-5’ de diferentes tipos de RNA Dentre as proteínas de atividade catalítica componentes desse complexo, a subunidade Rrp44 exibe a principal atividade de exoribonuclease e endonuleotídica Deste modo, este trabalho teve como objetivo a expressão da região C-terminal da subunidade Rrp44 de T cruzi no vetor pGEX-3X, a caracterização molecular através de ensaios de Northern e Southern blot e a localização por imunofluorescência em diferentes formas do parasito A proteína recombinante expressa apresentou cerca de 62 kDa Anticorpos policlonais, obtido por imunização de camundongos, reconheceram uma proteína de cerca de 1 kDa em extratos proteicos de forma tripomastigotas A imunolocalização da proteína nativa em formas epimastigotas e tripomastigotas mostrou que a proteína está distribuída pelo citoplasma e, em menor quantidade, também pelo núcleo do parasito A análise genômica por Northern blot e Southern blot mostrou, respectivamente, que o gene TcRrp44 apresenta um perfil de hibridação simples típico de gene presentes em poucas cópias, e um transcrito de cerca de 3 kb em todas as formas do parasito, indicando um gene constitutivo
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