Obtenção, seleção de eventos de soja contendo o gene AtAREB1 e análises da sinalização ABA-Dependente

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Barbosa, Elton Gargioni Grisoste
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/13528
Resumo: Resumo: Nos últimos anos, o Brasil tem estado à frente de inúmeros progressos científicos, gerando crescimento não somente no setor tecnológico, mas por extensão, também no setor econômico Com a produção de soja como carro-chefe no agronegócio brasileiro, é imprescindível que estratégias de engenharia genética voltadas para tolerância à estresses abióticos como a seca estejam entre os principais investimentos dentro da ciência e tecnologia nacional Atualmente, o desenvolvimento de plantas geneticamente modificadas (PGMs) tem focado suas estratégias na introdução de fatores de transcrição (FT) que controlam inúmeros genes estresse-induzidos O gene AREB1 é um FT com domínio bZIP e está relacionado à cascata ABA-dependente sob déficit hídrico O objetivo do presente estudo foi obter plantas de soja geneticamente modificadas com a construção pBI35SO:AtAREB1 (35S:AREB1) e caracterizar os eventos obtidos via Southern blot e RT-qPCR quanto ao número de cópias e expressão relativa do transgene em condições controle, além da segregação para a geração T1 Com base nos resultados obtidos, três eventos candidatos foram escolhidos para estudos posteriores relacionados à tolerância ao estresse hídrico em experimentos a serem conduzidos em casa de vegetação Este é o primeiro estudo reportando a modificação genética de soja com esta construção A eficiência de transformação obtida foi de ,75% (12 eventos positivos/1583 embriões transformados) De um total de oito eventos confirmados como positivos e não quiméricos, foram selecionados os candidatos A24, A2889 e A257, com uma ou duas, três e inúmeras cópias, respectivamente, e diferentes expressões relativas do transgene entre si Adicionalmente, uma derivação da fórmula empregada normalmente para metodologias de quantificação de número de cópias por RT-qPCR também foi utilizada, onde é descartado o uso de um evento previamente caracterizado com o gene de interesse como calibrador, utilizando-se assim o próprio gene de referência endógena através da fórmula 2-?Ct Os resultados foram coerentes pela comparação com métodos mais tradicionais como o Southern blot Conclui-se que a introdução da construção 35S:AREB1 em soja via biobalística originou eventos estáveis e com poucas cópias do transgene, constituindo-se em um importante passo não somente para o entendimento dessa via de sinalização ABA-dependente, mas também para desenvolver estratégias eficazes e sistêmicas à curto/médio prazo na obtenção de plantas tolerantes ao déficit hídrico
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Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética e Biologia MolecularAbstract: In the latest years, Brazil has being positioned ahead of many scientific progresses, generating growth not only in the technological sector but also by extension in economic sector As soybean production is economy flagship, is indispensable that genetic engineering strategies focused on abiotic stresses tolerance such as drought to be amongst the major investment in science and national technology Currently, the development of genetically modified plants (GMPs) is focused on the introduction of transcription factors (TFs) that controls numerous stress–inducible genes The AREB1 gene is a TF with bZIP domain and is related to the ABA-dependent pathway under water stress The objective of the present study was to obtain soybean plants genetically modified with the pBI35SO:AtAREB1 (35S:AREB1) genetic construction and characterize these events using Southern blot and RT-qPCR regarding to copy number and transgene relative expression under control conditions, besides segregation study on T1 generation Based on the results obtained, three candidate events were chosen to be used in further studies on water deficit tolerance in greenhouse conditions This is the first study reporting the use of this genetic construction in soybean Transformation efficiency was ,75% (12 positive events/1583 transformed embryos) From a total of eight positive and non-chimeric events, three best candidate events were chosen, A24, A2889 and A257 with one or two, three and above ten copies, respectively, and showing different transgene relative expression Additionally, a derivation of the formula normally used to quantify number of inserted copies using RT-qPCR was used, in which the use of a previously known calibrator sample is discarded Instead, an endogenous reference gene was used as the calibrator through the formula 2-?Ct Results from Southern blot and RT-qPCR techniques were consistent when compared Thus, the introduction of pBI35SO:AtAREB1 in soybean via biolistic generated stable events containing few copies of the transgene These results are important not only on the understanding of the ABA-dependent signalling pathway but also on the development of short-term efficient and systemic strategies to obtain soybean plants tolerant to droughtNepomuceno, Alexandre Lima [Orientador]Molinari, Hugo Bruno CorreaMarcelino-Guimarães, Francismar CorrêaFuganti-Pagliarini, Renata [Coorientadora]Barbosa, Elton Gargioni Grisoste2024-05-01T14:15:50Z2024-05-01T14:15:50Z2012.0028.02.2012info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/13528porMestradoGenética e Biologia MolecularCentro de Ciências BiológicasPrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia MolecularLondrinareponame:Repositório Institucional da UELinstname:Universidade Estadual de Londrina (UEL)instacron:UELinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-07-12T04:20:22Zoai:repositorio.uel.br:123456789/13528Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.bibliotecadigital.uel.br/PUBhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/OAI/oai2.phpbcuel@uel.br||opendoar:2024-07-12T04:20:22Repositório Institucional da UEL - 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