Análise genotípica e fenotípica de Enterococcus spp. provenientes de amostras clínicas e de alimento

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Rocha, Kátia Real
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/13363
Resumo: Resumo: Enterococcus spp são cocos Gram-positivos, freqüentemente encontrados na microbiota do trato gastrointestinal de humanos e outros animais São considerados oportunistas e têm um papel importante nas infecções nosocomiais, abrigando fatores de virulência, resistência a vários antimicrobianos, comumente utilizados em tratramento para Gram-positivos, além se serem capazes de adquirir genes de resistência, o que torna cada vez mais difícil o tratamento destas infecções Desta forma, técnicas de identificação que possibilitem resultados confiáveis e rápidos são importantes para a caracterização de enterococos, possibilitando um diagnóstico correto em hospitais Em contrapartida, os enterococos podem ser encontrados em alimentos, como queijos, provavelmente devido à contaminação fecal durante o processamento ou manuseio do mesmo Os objetivos deste trabalho foram comparar o perfil molecular e fenotípico de fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos de isolados provenientes de amostras de queijos e de hospital; correlacionar os dados de identificação e resistência obtidos pelo sistema automatizado MicroScan® com a técnica molecular e o método de disco difusão, respectivamente, nos isolados clínicos; e por fim correlacionar a presença de genes de resistência com dados de antibiograma No presente estudo foram avaliados 133 isolados provenientes de amostras de queijo frescal (13) e clínicos (3) Nas amostras de alimento foram identificados E faecalis (36,9%); E faecium (59,2%) e Enterococcus spp (3,9%) Estas mesmas espécies foram encontradas nos isolados clínicos, nas proporções 23,3% e 76,7% para E faecalis e E faecium respectivamente Para estes isolados, a identificação molecular (PCR) teve uma concordância de 9,% com o método automatizado Pela análise genotípica (RAPD) os isolados clínicos e de alimento apresentaram-se com uma alta diversidade genética Os isolados de E faecalis abrigaram, em frequência de isolados, maior quantidade de genes de virulência enquanto os de E faecium apresentaram maiores freqüências de resistência As concordâncias entre a presença de genes de resistência e sua expressão variaram dependendo do antimicrobiano testado Tanto os isolados de alimento quanto clínicos apresentaram gene e expressão de resistência para vancomicina, com maior freqüência para os isolados clínicos Todos os enterococos foram submetidos ao teste de gelatinase no qual as amostras clínicas apresentaram maior atividade desta enzima Apenas um isolado clínico apresentou-se fortemente formador de biofilme, os demais isolados clínicos e de alimento apresentaram-se como fracamente formadores de biofilme Os resultados do presente estudo sugerem que o método automatizado necessita de melhoramento quanto a acurácia de identificação de espécies menos isoladas A presença de genes de virulência e de resistência em isolados de alimentos implica num fator de risco a saúde, uma vez que estes podem transferí-los para enterococos encontrados no trato gastrointestinal de humanos
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correlacionar os dados de identificação e resistência obtidos pelo sistema automatizado MicroScan® com a técnica molecular e o método de disco difusão, respectivamente, nos isolados clínicos; e por fim correlacionar a presença de genes de resistência com dados de antibiograma No presente estudo foram avaliados 133 isolados provenientes de amostras de queijo frescal (13) e clínicos (3) Nas amostras de alimento foram identificados E faecalis (36,9%); E faecium (59,2%) e Enterococcus spp (3,9%) Estas mesmas espécies foram encontradas nos isolados clínicos, nas proporções 23,3% e 76,7% para E faecalis e E faecium respectivamente Para estes isolados, a identificação molecular (PCR) teve uma concordância de 9,% com o método automatizado Pela análise genotípica (RAPD) os isolados clínicos e de alimento apresentaram-se com uma alta diversidade genética Os isolados de E faecalis abrigaram, em frequência de isolados, maior quantidade de genes de virulência enquanto os de E faecium apresentaram maiores freqüências de resistência As concordâncias entre a presença de genes de resistência e sua expressão variaram dependendo do antimicrobiano testado Tanto os isolados de alimento quanto clínicos apresentaram gene e expressão de resistência para vancomicina, com maior freqüência para os isolados clínicos Todos os enterococos foram submetidos ao teste de gelatinase no qual as amostras clínicas apresentaram maior atividade desta enzima Apenas um isolado clínico apresentou-se fortemente formador de biofilme, os demais isolados clínicos e de alimento apresentaram-se como fracamente formadores de biofilme Os resultados do presente estudo sugerem que o método automatizado necessita de melhoramento quanto a acurácia de identificação de espécies menos isoladas A presença de genes de virulência e de resistência em isolados de alimentos implica num fator de risco a saúde, uma vez que estes podem transferí-los para enterococos encontrados no trato gastrointestinal de humanosDissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em MicrobiologiaAbstract: Enterococcus spp are Gram-positive cocci, often found in the microbiota of humans and animals gastrointestinal tracts Are considered opportunistic and have an important role in nosocomial infections, harboring virulence factors, resistance to multiple antimicrobials commonly used in tratramento for Gram-positive, in addition to being able to acquire resistance genes, makes it increasingly difficult to treat these infections Thus, techniques of identification that allow rapid and reliable results are important for the characterization of enterococci allowing a correct diagnosis in hospitals However, enterococci can be found in traditional cheese, probably due to faecal contamination during processing or handling The aims of this study were to compare the molecular and phenotypic profile of virulence factors and antimicrobial resistance of isolates obtained from cheese samples and hospital; correlate data identification and resistance obtained by the MicrosScan® automated system with molecular techniques and disk diffusion method, respectively, for the clinical enterococci, and finally to correlate the presence of resistance genes with antibiogram data In the present study we analyzed 133 isolates from cheese samples (13) and the clinical (3) In food samples were identified E faecalis (369%); E faecium (592%) and Enterococcus spp (39%) These same species have been found in clinical isolates in the proportions of 23,3% and 76,7% for E faecalis and E faecium, respectively For these isolates the molecular identification (PCR) had a concordance of 9% with the automated method By genotypic analysis (RAPD) clinical isolates and cheese had a high genetic diversity The E faecalis isolates harbored greater amount of virulence genes while E faecium showed greater frequency of resistance The concordance between the presence of resistance genes and their expression varied depending on the antimicrobial tested Both food and clinical isolates showed gene and expression of resistance to vancomycin, with higher frequency for the latter All enterococci were tested for gelatinase in which the clinical samples showed higher activity of this enzyme Only one clinical isolate was strongly biofilm-forming, the others clinical and cheese isolated showed up as poor biofilm formers The results of this study suggest that the automated method needs to be improved for the identification accuracy enterococci less frequently isolated The presence of virulence genes and resistance in food isolates implies a risk factor to health, since they can transfer them to enterococci found in the gastrointestinal tract of humansFurlaneto, Márcia Cristina [Orientador]Nakazato, GersonMikcha, Jane Martha GratonFurla Neto-Maia, Luciana [Coorientadora]Rocha, Kátia Real2024-05-01T14:14:51Z2024-05-01T14:14:51Z2012.0029.02.2012info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/13363porMestradoMicrobiologiaCentro de Ciências BiológicasPrograma de Pós-Graduação em MicrobiologiaLondrinareponame:Repositório Institucional da UELinstname:Universidade Estadual de Londrina (UEL)instacron:UELinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-07-12T04:19:55Zoai:repositorio.uel.br:123456789/13363Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.bibliotecadigital.uel.br/PUBhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/OAI/oai2.phpbcuel@uel.br||opendoar:2024-07-12T04:19:55Repositório Institucional da UEL - Universidade Estadual de Londrina (UEL)false
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