Análise in vitro da formação de biofilme por Arthrographis kalrae por microscopia eletrônica de varredura e comparação das atividades citotóxica e hemolítica entre os extratos de biofilme e de células planctônicas

• Autor(a) principal: Souza, Bianca Dorana de Oliveira
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
• Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/17122
• topic: Citotoxicidade; Fatores de virulência; Fungos; Hemólise; Fungos termodimórfico; Doenças em humanos - Fungos; Arthrographis kalrae (Fungo) - Citocidade; Ciências da Saúde - Medicina; Cytotoxicity; Fungi; Hemolysis; Virulence factors; Thermodimorphic fungi; Diseases in humans - Fungi; Arthrographis kalrae (Fungus) - Cytocity

Arthrographis kalrae é um fungo termodimórfico envolvido em diversas doenças em humanos, como ceratite, infecção pulmonar, sinusite, onicomicose, artrite, endocardite, meningite e acidente vascular cerebral. Estudos sobre a patogenicidade e fatores de virulência de A. kalrae são escassos, comprometendo o diagnóstico e o tratamento dos pacientes. Sabe-se que A. kalrae causa síndrome neurológica em camundongos e que apresenta atividade proteolítica, hemolítica e citotóxica, sendo que estas atividades podem representar importantes fatores de virulência deste patógeno. Biofilmes são comunidades microbianas fixadas a uma superfície que produzem matriz extracelular (ECM) própria. A formação de biofilme confere aos microrganismos um importante fator de virulência, pois os biofilmes são altamente resistentes aos antimicrobianos e às defesas do hospedeiro. Diversos biofilmes fúngicos têm sido investigados, como os biofilmes de Candida spp. e Aspergillus spp., porém, até o momento, a formação de biofilme por A. kalrae não havia sido demonstrada. Portanto, o objetivo deste trabalho foi demonstrar a formação de biofilme por A. kalrae e analisar as suas atividades citotóxica e hemolítica. O ensaio de biofilme foi feito em placas de poliestireno em diferentes tempos de incubação (4, 12, 24, 36, e 48 h) e a biomassa total do biofilme foi examinada por coloração de cristal violeta. Biofilmes de A. kalrae crescidos por 24 e 48h em poliestireno e em lamínulas de vidro foram analisados por microscopia eletrônica de varredura. Extratos totais de células planctônicas e de biofilme de A. kalrae foram analisados em ensaios de citotoxicidade (com linhagens celulares RAW 264.7 e JURKAT) e de atividade hemolítica (com hemácias de carneiro). A. kalrae formou biofilme em 24-48h com forte agregação de fungos e com área densa de ECM, principalmente em 48h. Os extratos totais de células planctônicas e de biofilme de A. kalrae apresentaram atividade citotóxica em células JURKAT. Nestas células, o extrato total de biofilme de A. kalrae apresentou maior atividade citotóxica em relação ao extrato total de células planctônicas (p<0,0001). Em células RAW 264.7, apenas o extrato total de biofilme de A. kalrae apresentou atividade citotóxica. O extrato total de células planctônicas de A. kalrae apresentou maior atividade hemolítica em relação ao extrato total de biofilme. Este estudo demonstrou pela primeira vez que A. kalrae apresenta capacidade de formar biofilme in vitro, que o biofilme apresenta atividades citotóxica e hemolítica e que o fator citotóxico é mais frequente nesta forma.