Expressão de citocinas e quantificação de oocistos por qPCR em gatos imunizados com proteína recombinante do Toxoplasma gondii

• Autor(a) principal: Gimenes, Ana Carolina Miura
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
• Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/11330
• topic: Imunologia veterinária; Toxoplasma gondii; Vacina veterinária; Genética; Expressão; Veterinary immunology; Veterinary vaccines; Expression; Genes

Resumo: Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular obrigatório causador da toxoplasmose, uma importante zoonose Os felídeos, dentre eles o gato doméstico, são hospedeiros definitivos do T gondii, neles ocorre a formação de oocistos eliminados nas fezes Visto que poucos estudos são focados em gatos, este teve como objetivo avaliar a expressão de citocinas (IL-6, IL-1, TNF-a, IFN-g) e quantificar oocistos pela técnica de qPCR em gatos imunizados com proteínas recombinantes rROP2 de T gondii e rHSP7 de Eimeria tenella Foram utilizados doze gatos, em 3 grupos; 4 animais cada G1: foi imunizado com 25 µg de rROP2, 25 µg de rHSP7 mais 2 µg de Quil-A; G2: recebeu 25 µg de E coli (vetor) mais 2 µg do Quil-A; G3: recebeu apenas solução salina; grupo controle Todas as doses imunizantes foram administradas nos dias , 21 e 42 do experimento pela via nasal O desafio foi feito no dia , com 6 cistos da cepa TgDoveBr8 (tipo II) Amostras de sangue foram coletadas de cada animal nos dias ,7,14, 21 e 35 pós infecção e fezes de todos os animais foram examinadas por 9 dias após o desafio pela técnica de Sheather (centrifugo-flutuação com exame microscópico) e pela qPCR No 7º dia pós infecção, biopsias de duodeno foram coletadas de seis animais (dois gatos/grupo) para análise histopatológica A partir do sangue total, realizou-se a separação de leucócitos, extração de RNA, síntese de cDNA e expressão gênica relativa pela qPCR com GAPDH como controle endógeno A análise histopatológica dos seis animais submetidos à endoscopia duodenal revelou enterite linfohistioplasmocitária moderada e difusa em todos os animais, alguns diferenciais de lesões foram encontrados entre os grupos Quanto aos sinais clínicos foi observada diarreia leve, de forma intermitente A expressão gênica relativa de TNF-a (p <1) e IL-1 (p=128) demonstrou diferença estatística significativa em um mesmo grupo durante diferentes períodos de infecção, no entanto não foram observadas diferenças em relação às citocinas IL-6 (p=3746) e IFN-g (7711) No 35º dia pós desafio, os animais imunizados (G1) apresentaram a maior expressão relativa de todas as citocinas IL-6 (285), TNF-a (64), IFN-g (164) e IL-1 (142) Todos os gatos eliminaram oocistos nas fezes Cinco gatos negativos no Sheather no (3º dpi) foram positivos na qPCR, com as seguintes quantificações (328; 45; 47; 59 e 1828 OOPG) A detecção de oocistos só foi possível no 4º dpi por Sheather Não houve diferença estatística entre a quantificação de oocistos por qPCR ou Sheather (p= 1116) Também não houve diferença significativa quanto á quantidade média de oocistos eliminados por grupo em qualquer uma das técnicas, qPCR (p=967) Sheather (p=6534) Houve estimulação das respostas celulares Th1 e Th2 após a fase aguda nos gatos imunizados com proteínas recombinantes associadas ao Quil-A Os animais do G2 (Quil-A) eliminaram menor quantidade média de oocistos, porém a diferença numérica não foi estatisticamente significativa quanto aos outros grupos qPCR pode ser usada como uma alternativa para o Sheather para detecção e quantificação de oocistos de T gondii