Extração, purificação e caracterização de polissacarídeos da biomassa do fungo ascomiceto Botryosphaeria rhodina MAMB-05

• Autor(a) principal: Eliane Kaori Fukuda
• Data de Publicação: 2007
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEL
• Texto Completo: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000126352

A biomassa do fungo ascomiceto Botryosphaeria rhodina, cultivado em glucose como fonte de carbono, foi separada do exopolissacarídeo para investigar a composição, em polissacarídeos, da biomassa. Para obtenção desses polissacarídeos a biomassa foi lavada com água, exaustivamente, até que nenhum resíduo de açúcar livre fosse detectado pelo ensaio do fenol-ácido sulfúrico, garantindo a total remoção do EPS. A massa micelial foi liofilizada, fragmentada e submetida, consecutivamente, a diferentes procedimentos extrativos, a saber, água fria (3x), água fervente (4x) e hidróxido de potássio a 2%, 100°C (2x). Esse procedimento separou as biomoléculas em grupos, de acordo com suas solubilidades. As frações Q1 (aquosa a quente) e K1 (alcalina) foram selecionadas para dar prosseguimento aos estudos por serem quantitativamente majoritárias e com grande diferença percentual entre seus constituintes monossacarídicos. A fração Q1 foi fracionada por cromatografia de filtração em gel Sepharose CL-4B em Q1A, Q1B, Q1C e Q1D. A sub-fração Q1A com maior tamanho molecular, de acordo com seu volume de eluição na cromatografia de filtração em gel, apresentou glucose como componente majoritário. Estudos espectroscópicos por infravermelho e ressonância magnética nuclear de carbono treze mostraram que todas as ligações glicosídicas encontravam-se em configuração ß. A ausência de sinal na região de d 60 ppm e a presença de um sinal intenso em 69,01, bem como os resultados provenientes da metilação permitiram caracterizar a sub-fração Q1A como uma ß-(1?6)-D-glucana. A sub-fração Q1C, constituída principalmente de galactose, após análises espectroscópicas e de metilação teve sua estrutura determinada como de uma galactofuranana com unidades 5-O e 6-O substituídas. As sub-frações Q1B e Q1D não foram investigadas neste trabalho porque os experimentos conduzidos indicaram a necessidade de etapas adicionais de purificação. A fração K1, obtida como primeira extração alcalina, após neutralização, diálise, precipitação em etanol e solubilização em água apresentou um resíduo (K1P) que foi separado por tratamentos sucessivos de gelo e degelo da parte solúvel (K1S). O material insolúvel, denominado K1P, constituído principalmente de glucose (93%) foi caracterizado como uma glucana ß-(1?3) com ramificação em C-6 através de análises espectroscópicas e de metilação. A fração solúvel (K1S), fracionada por cromatografia de filtração em gel de Sepharose CL-4B, apresentou três picos denominados de K1SA, K1SB e K1SC. A sub-fração K1SA, após hidrólise ácida apresentou principalmente glucose (92%) e a cromatografia gasosa dos acetatos de alditóis apresentou três picos, identificados como 2,3,4,6-tetra-O-metil, 2,3,6-tri-O-metil e 2,3-di-O-metil derivados. Os sinais de FTIR em 1550 e 920 cm-1 foram característicos de glucanas e em 850 cm-1 de a-glucanas. O espectro de ressonância magnética nuclear de carbono treze mostrou sinais que correspondem a uma a-(1?4) D-glucana com pequeno grau de substituição em C-6. Os resultados encontrados neste estudo indicam que a composição da biomassa do ascomiceto Botryosphaeria rhodina é semelhante à biomassa de diferentes fungos e, provavelmente, as diferenças no grau de substituição correspondem às variações no tempo de cultivo e/ou a necessidade de etapas adicionais de purificação.