Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do Brasil

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Barbara Andreo dos
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Estadual de Maringá (RI-UEM)
Texto Completo: http://repositorio.uem.br:8080/jspui/handle/1/7320
Resumo: Orientador: Prof. Dr. Ueslei Teodoro
id UEM-10_4dead6cda90585dad7dd6ce521fd55b5
oai_identifier_str oai:localhost:1/7320
network_acronym_str UEM-10
network_name_str Repositório Institucional da Universidade Estadual de Maringá (RI-UEM)
repository_id_str
spelling Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do BrasilFlebotomíneosLeishmaniose tegumentarMultiplex-PCRLeishmania616.9364Orientador: Prof. Dr. Ueslei TeodoroTese (Doutorado em Ciências da Saúde)--Universidade Estadual de Maringá, Centro de Ciências da Saúde, 2018RESUMO: As leishmanioses têm grande importância em saúde pública por se tratar de um complexo de doenças com diferentes formas clínicas e epidemiológicas, causadas por protozoários do gênero Leishmania e transmitidos por fêmeas de flebotomíneos. A técnica da múltipla reação em cadeia da polimerase (multiplex-PCR) tem sido usada no diagnóstico da leishmaniose e para verificar as taxas de infecção natural de flebotomíneos por Leishmania spp. Assim, os objetivos deste estudo foram conhecer a fauna e o comportamento de flebotomíneos, e padronizar a multiplex-PCR para a detecção de Leishmania em flebotomíneo de ilhas do Rio Paraná, noroeste do estado do Paraná, Brasil. Os flebotomíneos foram coletados com armadilhas de Falcão, em dez ilhas: Bandeira, Carioca, Fina, Mutum, Japonesa, São José Catarino, Santa Rosa, Floresta, Chapéu Velho e Cruzeiro, de novembro de 2012 a novembro de 2014. Os flebotomíneos coletados foram identificados e armazenados em tubos com isopropanol, em pools de 10 fêmeas, para posterior extração do DNA. Os insetos foram macerados em um tampão de lise e a extração foi realizada com Chelex® 100 Resin. Dois pares de primers foram usados na multiplex-PCR. O primeiro par foi A1 e A2, que amplifica o fragmento de 120 pb da região conservada do minicirculo do kinetoplasto (kDNA) do gênero Leishmania. O segundo par de primers foi 5Llcac e 3Llcac que amplifica um fragmento de 220 pb da região do gene IVS6 da cacofonia em insetos do gênero Lutzomyia. Os produtos amplificados foram analisados em eletroforese de gel de agarose. Ny. neivai foi a única espécie coletada. Um total de 3.870 (387 pools) fêmeas de Ny. neivai foi submetido à multiplex-PCR. Os resultados da multiplex-PCR para detecção de Leishmania em flebotomíneos foram negativos. Portanto, a padronização da multiplex-PCR permitiu a determinação da taxa de infecção natural em flebotomíneos por Leishmania em uma única reação. Além disso, a multiplex-PCR pode ser usada quando há grande número de flebotomíneos a ser analisado, como nesta pesquisa. Apesar de não ter sido detectada a infecção natural de Ny. neivai por Leishmania, vale destacar que anteriormente, na ilha Mutum, este flebotomíneo foi detectado com infecção natural por Leishmania (Viannia), demonstrando a importância deste inseto na epidemiologia da leishmaniose cutâneaABSTRACT: Leishmaniasis is of great importance in public health because it is a complex of diseases with different clinical and epidemiological forms, caused by protozoa of the genus Leishmania and transmitted by females of sandflies. Multiplex Polymerase chain reaction technique (multiplex PCR) has been used to the diagnosis of leishmaniasis and to verify the rates of natural infection of sandflies by Leishmania. Thus, the objectives of this study were to identify the fauna, the behavior of sandflies and standardization of the multiplex PCR reaction for the detection of Leishmania, in those insects in the islands of the Paraná River, Northwest of the state of Paraná, Brazil. Sandflies were collected with Falcão traps in ten islands: Bandeira, Carioca, Fina, Mutum, Japonesa, São José Catarino, Santa Rosa, Floresta, Chapéu Velho and Cruzeiro, from November 2012 to November 2014. Sandflies were attracted and placed in tubes with isopropanol, in pools of 10 females, for later extraction of the DNA. Insects were then added in a buffer, and the extraction was performed with Chelex® 100 Resin. Two pairs of primers were used in multiplex PCR. The first pair was A1 and A2, which amplify a fragment of 120 bp region the minicircle kinetoplast (kDNA) of the genus Leishmania. The second pair of primers was 5Llcac and 3Llcac, that amplify a fragment of 220 bp region the cacophony gene IVS6 in insects of the genus Lutzomyia. The amplified results were analysed in agarose gel electrophoresis. Ny. neivai the only species found. A total of 3,870 (387 pools) female of Ny. neivai was submitted to the multiplex PCR. The multiplex PCR results for Leishmania detection in sandflies were negative. The islands studied still preserve the native forest that favors the enzootic cycle of Leishmania. Therefore, the multiplex PCR was standardized, enabling determination of the infection rate of sandflies by members of the genus Leishmania in a single analysis, with certainty that the material analyzed is suitable for PCR. Moreover, the multiplex PCR is particularly useful when a large number of sandflies has to be analyzed, like in this research. Although no natural infection of Ny. neivai by Leishmania was found in this study, previously, on Mutum Island, Ny. neivai was detected with natural infection by Leishmania (Viannia), demonstrating the importance of this species in the epidemiology of cutaneous leishmaniasisTeodoro, UesleiAristides, Sandra Mara AlessiDemarchi, Izabel GalhardoTeixeira, Jorge Juarez VieiraNeitzke-Abreu, Herintha CoetoUniversidade Estadual de MaringáCentro de Ciências da SaúdePrograma de Pós-Graduação em Ciências da SaúdeSantos, Barbara Andreo dos2024-01-25T22:40:47Z2024-01-25T22:40:47Z2018info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis60 p. : il. (algumas color.).application/pdfhttp://repositorio.uem.br:8080/jspui/handle/1/7320porreponame:Repositório Institucional da Universidade Estadual de Maringá (RI-UEM)instname:Universidade Estadual de Maringá (UEM)instacron:UEMinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-01-25T22:40:47Zoai:localhost:1/7320Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.uem.br:8080/oai/requestopendoar:2024-04-23T15:00:21.695568Repositório Institucional da Universidade Estadual de Maringá (RI-UEM) - Universidade Estadual de Maringá (UEM)false
dc.title.none.fl_str_mv Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do Brasil
title Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do Brasil
spellingShingle Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do Brasil
Santos, Barbara Andreo dos
Flebotomíneos
Leishmaniose tegumentar
Multiplex-PCR
Leishmania
616.9364
title_short Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do Brasil
title_full Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do Brasil
title_fullStr Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do Brasil
title_full_unstemmed Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do Brasil
title_sort Multiplex-PCR para pesquisa de Leishmania em Nyssomyia neivai (Pinto), espécie dominante nas ilhas do Rio Paraná, sul do Brasil
author Santos, Barbara Andreo dos
author_facet Santos, Barbara Andreo dos
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Teodoro, Ueslei
Aristides, Sandra Mara Alessi
Demarchi, Izabel Galhardo
Teixeira, Jorge Juarez Vieira
Neitzke-Abreu, Herintha Coeto
Universidade Estadual de Maringá
Centro de Ciências da Saúde
Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde
dc.contributor.author.fl_str_mv Santos, Barbara Andreo dos
dc.subject.por.fl_str_mv Flebotomíneos
Leishmaniose tegumentar
Multiplex-PCR
Leishmania
616.9364
topic Flebotomíneos
Leishmaniose tegumentar
Multiplex-PCR
Leishmania
616.9364
description Orientador: Prof. Dr. Ueslei Teodoro
publishDate 2018
dc.date.none.fl_str_mv 2018
2024-01-25T22:40:47Z
2024-01-25T22:40:47Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://repositorio.uem.br:8080/jspui/handle/1/7320
url http://repositorio.uem.br:8080/jspui/handle/1/7320
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 60 p. : il. (algumas color.).
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da Universidade Estadual de Maringá (RI-UEM)
instname:Universidade Estadual de Maringá (UEM)
instacron:UEM
instname_str Universidade Estadual de Maringá (UEM)
instacron_str UEM
institution UEM
reponame_str Repositório Institucional da Universidade Estadual de Maringá (RI-UEM)
collection Repositório Institucional da Universidade Estadual de Maringá (RI-UEM)
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da Universidade Estadual de Maringá (RI-UEM) - Universidade Estadual de Maringá (UEM)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1813258693422088192

Registros relacionados