Expressão diferencial de genes de resistência à antracnose do colmo (Colletotrichum graminicola) em germoplasma de milho tropical

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Finger, Anderson Carlos
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEPG
Texto Completo: http://tede2.uepg.br/jspui/handle/prefix/3864
Resumo: A antracnose causada pelo fungo Colletotrichum graminicola (Ces.) Wils., é uma das principais podridões da base do colmo no milho. O uso de cultivares resistentes é a estratégia de controle mais eficiente, econômica e sustentável. Neste estudo, foi realizado uma análise temporal da expressão gênica de duas linhagens endogâmicas de milho tropical inoculadas com C. graminicola. Foram utilizadas duas linhagens contrastantes para resistência, L04-2 (resistente) e L99-4 (suscetível), as quais foram cultivadas em duas condições ambientais, câmara de crescimento e casa de vegetação, e inoculadas no colmo com o patógeno nos estádios V6 e VT, respectivamente. Para a extração do mRNA, tecido da medula do segundo internódio dos colmos, foi coletado as 0, 6, 12, 24, 48, 96, 168 e 336 horas após a inoculação. A análise da expressão gênica foi realizada através da RT-qPCR, para onze genes relacionados à resistência/defesa, e a quantificação relativa da expressão de cada gene foi determinada pelo método Cq comparativo. No estádio V6, houve expressão diferencial precoce para os genes ZmPR5, ZmLOX3, ZmBB, ZmWIP1 e ZmCYP94B12, enquanto que no estádio VT, para os genes ZmPR3, ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX3, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 e ZmACO31, com maior nível de indução na linhagem resistente L04-2 nos dois estádios. O pico de expressão dos genes ZmBB e ZmWIP1 no estádio V6, e dos genes ZmPR1, ZmPR3, ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 e ZmACO31 no estádio VT, foi atingido anteriormente na linhagem resistente L04-2, em relação à linhagem suscetível L99-4. Os resultados demonstraram que a expressão dos genes ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 e ZmCYP94B12 foi afetada pelo estádio de desenvolvimento, com maior nível de expressão no estádio VT. Nesse estádio, o ZmWIP1 evidenciou um padrão de expressão notavelmente contrastante entre as linhagens, confirmando a indução da resistência precocemente na linhagem resistente L04-2, e tardiamente na linhagem suscetível L99-4. Sugere-se que no estádio V6, o gene ZmBB teve maior contribuição para a resistência ao C. graminicola, enquanto que em VT, o gene ZmLOX5. A resistência à antracnose do colmo da linhagem L04-2, é explicada por uma rápida indução de diferentes genes de defesa da planta, confirmando sua elevada resistência ao C. graminicola. Os resultados da expressão gênica ampliaram o conhecimento científico sobre os genes mais efetivos para a resistência à antracnose do colmo em germoplasma de milho tropical, bem como a resposta da expressão gênica das linhagens endogâmicas dependente do estádio de desenvolvimento (V6 ou VT). O conhecimento científico obtido poderá auxiliar no desenvolvimento de cultivares de milho com maior resistência à antracnose do colmo.
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Expressão diferencial de genes de resistência à antracnose do colmo (Colletotrichum graminicola) em germoplasma de milho tropical. 2022. Dissertação (Mestrado em Agronomia) – Universidade Estadual de Ponta Grossa, Ponta Grossa, 2023.http://tede2.uepg.br/jspui/handle/prefix/3864A antracnose causada pelo fungo Colletotrichum graminicola (Ces.) Wils., é uma das principais podridões da base do colmo no milho. O uso de cultivares resistentes é a estratégia de controle mais eficiente, econômica e sustentável. Neste estudo, foi realizado uma análise temporal da expressão gênica de duas linhagens endogâmicas de milho tropical inoculadas com C. graminicola. Foram utilizadas duas linhagens contrastantes para resistência, L04-2 (resistente) e L99-4 (suscetível), as quais foram cultivadas em duas condições ambientais, câmara de crescimento e casa de vegetação, e inoculadas no colmo com o patógeno nos estádios V6 e VT, respectivamente. Para a extração do mRNA, tecido da medula do segundo internódio dos colmos, foi coletado as 0, 6, 12, 24, 48, 96, 168 e 336 horas após a inoculação. A análise da expressão gênica foi realizada através da RT-qPCR, para onze genes relacionados à resistência/defesa, e a quantificação relativa da expressão de cada gene foi determinada pelo método Cq comparativo. No estádio V6, houve expressão diferencial precoce para os genes ZmPR5, ZmLOX3, ZmBB, ZmWIP1 e ZmCYP94B12, enquanto que no estádio VT, para os genes ZmPR3, ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX3, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 e ZmACO31, com maior nível de indução na linhagem resistente L04-2 nos dois estádios. O pico de expressão dos genes ZmBB e ZmWIP1 no estádio V6, e dos genes ZmPR1, ZmPR3, ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 e ZmACO31 no estádio VT, foi atingido anteriormente na linhagem resistente L04-2, em relação à linhagem suscetível L99-4. Os resultados demonstraram que a expressão dos genes ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 e ZmCYP94B12 foi afetada pelo estádio de desenvolvimento, com maior nível de expressão no estádio VT. Nesse estádio, o ZmWIP1 evidenciou um padrão de expressão notavelmente contrastante entre as linhagens, confirmando a indução da resistência precocemente na linhagem resistente L04-2, e tardiamente na linhagem suscetível L99-4. Sugere-se que no estádio V6, o gene ZmBB teve maior contribuição para a resistência ao C. graminicola, enquanto que em VT, o gene ZmLOX5. A resistência à antracnose do colmo da linhagem L04-2, é explicada por uma rápida indução de diferentes genes de defesa da planta, confirmando sua elevada resistência ao C. graminicola. Os resultados da expressão gênica ampliaram o conhecimento científico sobre os genes mais efetivos para a resistência à antracnose do colmo em germoplasma de milho tropical, bem como a resposta da expressão gênica das linhagens endogâmicas dependente do estádio de desenvolvimento (V6 ou VT). O conhecimento científico obtido poderá auxiliar no desenvolvimento de cultivares de milho com maior resistência à antracnose do colmo.Anthracnose caused by the fungus Colletotrichum graminicola (Ces.) Wils. is one of the main stalk-base rots in maize. The use of resistant cultivars is the most efficient, economical and sustainable control strategy. In this study, a temporal analysis of gene expression of two inbred tropical maize lines inoculated with C. graminicola was performed. Two lines contrasting for resistance, L04-2 (resistant) and L99-4 (susceptible), were used and cultivated in two environmental conditions, growth chamber and greenhouse, and inoculated in the stalk with the pathogen at the V6 and VT stages, respectively. For mRNA extraction, pith tissue from the second internode of the stalks was collected at 0, 6, 12, 24, 48, 96, 168 and 336 hours after inoculation. Gene expression analysis was performed by RT-qPCR for eleven resistance/defense related genes, and the relative quantification of the expression of each gene was determined by the comparative Cq method. At the V6 stage, there was early differential expression for genes ZmPR5, ZmLOX3, ZmBB, ZmWIP1 and ZmCYP94B12, while at the VT stage, for genes ZmPR3, ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX3, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 and ZmACO31, with a higher level of induction in resistant line L04-2 at both stages. The peak expression of ZmBB and ZmWIP1 genes at the V6 stage, and of ZmPR1, ZmPR3, ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 and ZmACO31 genes at the VT stage, was reached earlier in the resistant line L04-2 compared to the susceptible line L99-4. The results showed that the expression of ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 and ZmCYP94B12 genes was affected by developmental stage, with higher expression level at VT stage. At this stage, ZmWIP1 evidenced a remarkably contrasting expression pattern between lines, confirming the induction of resistance early in resistant line L04-2, and late in susceptible line L99-4. It is suggested that at the V6 stage, the ZmBB gene had the greatest contribution to resistance to C. graminicola, whereas at VT, the ZmLOX5 gene. The resistance to anthracnose stalk rot of line L04-2, is explained by a rapid induction of different plant defense genes, confirming its high resistance to C. graminicola. The gene expression results extended the scientific knowledge about the most effective genes for anthracnose stalk rot resistance in tropical maize germplasm, as well as the gene expression response of inbred lines dependent on the developmental stage (V6 or VT). The scientific knowledge obtained may assist in the development of maize cultivars with greater resistance to anthracnose stalk rot.Submitted by Ivani Silva (ivsilva@uepg.br) on 2023-03-27T18:02:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Anderson Carlos Finger.pdf: 1938322 bytes, checksum: c1b5efb82e6851f44a5742005729e7ff (MD5)Made available in DSpace on 2023-03-27T18:02:17Z (GMT). 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Zea mays L.
podridão do colmo
genes de defesa
expressão gênica
RT- qPCR
Zea mays L.
stalk rot
defense genes
gene expression
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podridão do colmo
genes de defesa
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Zea mays L.
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description A antracnose causada pelo fungo Colletotrichum graminicola (Ces.) Wils., é uma das principais podridões da base do colmo no milho. O uso de cultivares resistentes é a estratégia de controle mais eficiente, econômica e sustentável. Neste estudo, foi realizado uma análise temporal da expressão gênica de duas linhagens endogâmicas de milho tropical inoculadas com C. graminicola. Foram utilizadas duas linhagens contrastantes para resistência, L04-2 (resistente) e L99-4 (suscetível), as quais foram cultivadas em duas condições ambientais, câmara de crescimento e casa de vegetação, e inoculadas no colmo com o patógeno nos estádios V6 e VT, respectivamente. Para a extração do mRNA, tecido da medula do segundo internódio dos colmos, foi coletado as 0, 6, 12, 24, 48, 96, 168 e 336 horas após a inoculação. A análise da expressão gênica foi realizada através da RT-qPCR, para onze genes relacionados à resistência/defesa, e a quantificação relativa da expressão de cada gene foi determinada pelo método Cq comparativo. No estádio V6, houve expressão diferencial precoce para os genes ZmPR5, ZmLOX3, ZmBB, ZmWIP1 e ZmCYP94B12, enquanto que no estádio VT, para os genes ZmPR3, ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX3, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 e ZmACO31, com maior nível de indução na linhagem resistente L04-2 nos dois estádios. O pico de expressão dos genes ZmBB e ZmWIP1 no estádio V6, e dos genes ZmPR1, ZmPR3, ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 e ZmACO31 no estádio VT, foi atingido anteriormente na linhagem resistente L04-2, em relação à linhagem suscetível L99-4. Os resultados demonstraram que a expressão dos genes ZmPR5, ZmPR10.1, ZmLOX5, ZmBB, ZmWIP1 e ZmCYP94B12 foi afetada pelo estádio de desenvolvimento, com maior nível de expressão no estádio VT. Nesse estádio, o ZmWIP1 evidenciou um padrão de expressão notavelmente contrastante entre as linhagens, confirmando a indução da resistência precocemente na linhagem resistente L04-2, e tardiamente na linhagem suscetível L99-4. Sugere-se que no estádio V6, o gene ZmBB teve maior contribuição para a resistência ao C. graminicola, enquanto que em VT, o gene ZmLOX5. A resistência à antracnose do colmo da linhagem L04-2, é explicada por uma rápida indução de diferentes genes de defesa da planta, confirmando sua elevada resistência ao C. graminicola. Os resultados da expressão gênica ampliaram o conhecimento científico sobre os genes mais efetivos para a resistência à antracnose do colmo em germoplasma de milho tropical, bem como a resposta da expressão gênica das linhagens endogâmicas dependente do estádio de desenvolvimento (V6 ou VT). O conhecimento científico obtido poderá auxiliar no desenvolvimento de cultivares de milho com maior resistência à antracnose do colmo.
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