Avaliação in vitro e in vivo do efeito de nanopartículas de ouro estabilizadas com ácido ascórbico para capeamento pulpar

• Autor(a) principal: Sanson, Mariane Aparecida Savi
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEPG
• Texto Completo: http://tede2.uepg.br/jspui/handle/prefix/3345
• topic: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::ODONTOLOGIA; fluxometria por laser-Doppler; capeamento da polpa dentária; nanopartículas metálicas; técnicas de cultivo de células; coloide de ouro; laser-Doppler flowmetry; dental pulp capping; metal nanoparticles; cell culture techniques; gold colloid

Introdução: O capeamento pulpar direto é uma técnica que consiste na aplicação de um material diretamente sobre o tecido pulpar exposto, e tem por objetivo preservar a vitalidade do elemento dentário. As nanopartículas de ouro (AuNPs) podem contribuir para o tratamento da inflamação pulpar, devido a seu efeito antioxidante e antiinflamatório. Objetivo: 1) caracterizar as AuNPs estabilizadas com ácido ascórbico e avaliar se apresentam efeito citotóxico e anti-inflamatório em cultura celular; 2) verificar se a fluxometria por laser-Doppler (FLD) permite o diagnóstico da condição pulpar em molares de ratos; e 3) avaliar se as AuNPs interferem no reparo pulpar em molares de ratos. Material e métodos: Estudo 1: Fibroblastos 3T3, macrófagos J774 e células indiferenciadas de polpa dental humana (CIPDH) foram tratados com diferentes concentrações de AuNPs por 24 e 48h, e analisada a viabilidade celular através do ensaio de MTT para as 3 linhagens e análise da morfologia celular para CIPDH. Em macrófagos, a resposta inflamatória foi induzida por lipopolissacarídeo (LPS), sendo quantificada a liberação de TNF-a (ELISA) após tratamento com as AuNPs. Estudo 2: Utilizando a fluxometria por laser-Doppler (FLD), foi aferido o fluxo sanguíneo pulpar (FSP) de primeiros molares superiores de 10 ratos por 2 diferentes operadores em 2 momentos com diferentes técnicas (sem e com guias), sendo determinado o método com melhor reprodutibilidade através da análise do coeficiente de variação e do teste de concordância de Bland-Altman juntamente com o teste t para uma amostra. Na sequência, foram criados modelos de necrose e inflamação pulpar em primeiros molares superiores de ratos (n=5), e os valores de FSP foram comparados com os achados histopatológicos a fim de obter a especificidade e sensibilidade do método para o diagnóstico de inflamação e necrose pulpar através da análise da curva ROC. Estudo 3: Foram realizadas exposições pulpares em primeiros molares superiores de ratos, as quais foram tratadas com: algodão estéril (controle, n=4), hidróxido de cálcio (n=4), e AuNPs (n=4) como material de capeamento e os dentes restaurados com resina composta por 21 dias. O FSP foi aferido periodicamente através de FLD, e a análise histopatológica considerou escores para severidade da inflamação, integridade do tecido pulpar e produção de barreira mineralizada. ANOVA com pós teste de Tukey foi empregago para comparação de dados numéricos paramétricos e o teste de Kruskal-Wallis seguido teste de comparações múltiplas de Dun para análise de escores. Resultados: As AuNPs não apresentaram efeitos citotóxicos sobre macrófagos J774, fibroblastos 3T3 e CIPDH. Entretanto, após 48h as CIPDH demonstraram alterações morfológicas indicativas de apoptose. Baixas concentrações de AuNPs regularam negativamente a liberação de TNF-a in vitro em macrófagos. A padronização do método de FLD indicou que aferições realizadas sem guias foram mais reprodutíveis. Os dentes com inflamação pulpar apresentaram um aumento nos valores de FSP de 48% e 52%, após 6h e 48h respectivamente. Em dentes com necrose pulpar os valores de FSP diminuíram 44% após 21 dias. A FLD apresentou boa especificidade (90%) e sensibilidade (100%) para o diagnóstico de necrose pulpar, no entanto, foi ineficiente para diferenciar a inflamação pulpar. No terceiro estudo, todos os materiais testados para capeamento pulpar promoveram uma diminuição do FSP imediatamente após o procedimento, sendo que o FSP se reestabeleceu aos valores normais durante o período experimental, exceto no grupo CaOH, o qual manteve um drecrécimo de 21% após 21 dias (n=4 por grupo). As AuNPs não promoveram controle da severidade da inflamação e não induziram a formação de matriz dentinária. Conclusões: As AuNPs apresentam atividade anti-inflamatória in vitro, não demonstrando efeito citotóxico sobre fibroblastos, macrófagos e células indiferenciadas de polpa dental humana. A FLD é capaz de diferenciar polpa vital e polpa não vital (necrose) em primeiros molares superiores de ratos, porém o método não foi sensível nem específico para diagnosticar a condição de inflamação pulpar. As AuNPs não apresentam benefício adicional na formação de dentina reparadora e no controle da intensidade da inflamação quando utilizadas isoladamente sobre o tecido pulpar exposto como material de capeamento.