Marcadores fenotípicos e genotípicos de resistência aos antimicrobianos em enterobactérias e Staphylococcus spp. e detecção de genes para a produção de enterotoxina estafilocócica em cepas isoladas de equipamentos da cozinha de um hospital universitário no município do Rio de Janeiro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Miyahira, Roberta Fontanive
Data de Publicação: 2012
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UERJ
Texto Completo: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14365
Resumo: Enterobacteria are important agents of infections related to health care services and antimicrobial resistance by production of β-lactamases is an additional problem in this scenario. Staphylococcus spp is considered a human pathogen frequently associated with infections acquired in hospital. The aim of this study was to evaluate antimicrobial resistance in isolates of enterobacteria and Staphylococcus spp. isolated from equipment used in the preparation of diets for the patients admitted to a university hospital in the city of Rio de Janeiro, and to verify presence of genes encoding enterotoxins in Staphylococcus spp. Enterobacteria and Staphylococcus spp. were isolated and identified by conventional methodology. All isolates were tested by disk diffusion method. We performed the minimum inhibitory concentration (MIC) by broth microdilution technique. The search for genes encoding β-lactamases in enterobacteria was performed by polymerase chain reaction (PCR) for the genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, blaOXA-1 and blaCMY-2. For Staphylococcus spp. were screened by PCR, the genes for resistance to methicillin, gentamicin and erythromycin and the genes encoding enterotoxins (sea-see, seg-sej, sen-ser and seu). We recovered 97 isolates of enterobacteria, 40 from blender and 57 from mixer and 40 isolates of Staphylococcus spp., 20 of each equipment. Among the enterobacteria, Enterobacter spp. was isolated more frequently (n=37, 38%). We also isolated six isolates of Salmonella spp. Among the enterobacteria, 80% (n=79) were resistant to at least one antimicrobial and 38% (n=37) to three or more. Phenotypic expression of presumptive β-lactamase type AmpC was detected in 32 strains. The blaCMY-2 gene was not found. Twelve isolates showed inhibition zones with screaning test positive for the detection of ESBL. We have detected the presence of the gene blaSHV in K. pneumoniae subsp. pneumoniae. The sequencing of the gene identify as blaSHV-36. Among the Staphylococcus, eight were identified as coagulase-positive (SCP) and 32 as coagulase-negative (SCN). The eight isolates of SCP were identified as S. aureus subsp. aureus. Among the SCN, the most frequently identified species were: S. caprae (n=7, 17.5%), S. simulans (n=5, 12.5%) and S. epidermidis (n=4, 10%). Of these, 83% (n=33) were resistant to at least one antimicrobial and 30% (n=12) were resistant to more than three. Two isolates (5%) of S. epidermidis showed resistance to six antibiotics and genes for resistance to methicillin, erythromycin and gentamycin. All isolates that were resistant to gentamicin in MIC and TSA showed the gene aac(2')/aph(6''). ermB gene was also observed in S hominis subsp hominis that was resistance to erythromycin in MIC and TSA. We have detected the presence of at least one gene encoding enteroxotxina in 83% (n=33) of isolates. The gene seg was detected in 11 isolates, the gene sei in 17 isolates and the gene sen in 31 isolates. The results imply diets prepared with such equipment as a vehicle for spreading enteropathogens and Staphylococcus spp. with resistance markers and enterotoxin-encoding genes relevant in the hospital.
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Tese (Doutorado em Microbiologia Médica Humana) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2012.http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14365Enterobacteria are important agents of infections related to health care services and antimicrobial resistance by production of β-lactamases is an additional problem in this scenario. Staphylococcus spp is considered a human pathogen frequently associated with infections acquired in hospital. The aim of this study was to evaluate antimicrobial resistance in isolates of enterobacteria and Staphylococcus spp. isolated from equipment used in the preparation of diets for the patients admitted to a university hospital in the city of Rio de Janeiro, and to verify presence of genes encoding enterotoxins in Staphylococcus spp. Enterobacteria and Staphylococcus spp. were isolated and identified by conventional methodology. All isolates were tested by disk diffusion method. We performed the minimum inhibitory concentration (MIC) by broth microdilution technique. The search for genes encoding β-lactamases in enterobacteria was performed by polymerase chain reaction (PCR) for the genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, blaOXA-1 and blaCMY-2. For Staphylococcus spp. were screened by PCR, the genes for resistance to methicillin, gentamicin and erythromycin and the genes encoding enterotoxins (sea-see, seg-sej, sen-ser and seu). We recovered 97 isolates of enterobacteria, 40 from blender and 57 from mixer and 40 isolates of Staphylococcus spp., 20 of each equipment. Among the enterobacteria, Enterobacter spp. was isolated more frequently (n=37, 38%). We also isolated six isolates of Salmonella spp. Among the enterobacteria, 80% (n=79) were resistant to at least one antimicrobial and 38% (n=37) to three or more. Phenotypic expression of presumptive β-lactamase type AmpC was detected in 32 strains. The blaCMY-2 gene was not found. 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All isolates that were resistant to gentamicin in MIC and TSA showed the gene aac(2')/aph(6''). ermB gene was also observed in S hominis subsp hominis that was resistance to erythromycin in MIC and TSA. We have detected the presence of at least one gene encoding enteroxotxina in 83% (n=33) of isolates. The gene seg was detected in 11 isolates, the gene sei in 17 isolates and the gene sen in 31 isolates. The results imply diets prepared with such equipment as a vehicle for spreading enteropathogens and Staphylococcus spp. with resistance markers and enterotoxin-encoding genes relevant in the hospital.A resistência aos antimicrobianos pela produção de β-lactamases em enterobactérias é um problema adicional neste cenário. Staphylococcus spp é considerado um patógeno humano freqüentemente associado a infecções adquiridas no ambiente hospitalar. O objetivo desse trabalho foi estudar a resistência aos antimicrobianos em cepas de Enterobactérias e Staphylococcus spp. isoladas de equipamentos utilizados no preparo de dietas destinadas à pacientes internados em um hospital universitário no município do Rio de Janeiro, além de verificar a presença de genes codificadores de enterotoxinas nas cepas de Staphylococcus spp. As enterobactérias e os Staphylococcus spp. foram isolados e identificados por metodologia convencional. Para o teste de susceptibilidade aos antimicrobianos foram utilizados discos contendo antimicrobianos clinicamente relevantes. Foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) pela técnica de microdiluição em caldo para os antimicrobianos clinicamente relevantes. A pesquisa de genes que codificam β-lactamases em enterobactérias foi realizada pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento para os genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, blaOXA-1 e blaCMY-2. Para Staphylococcus spp. foram pesquisados, através da PCR e sequenciamento, os genes de resistência a meticilina, gentamicina e eritromicina e os genes codificadores de enterotoxinas (sea-see, seg-sej, sen-ser e seu). Foram isoladas 97 cepas de enterobactérias, 40 de liquidificador e 57 de batedeira e 40 cepas de Staphylococcus spp., 20 de cada equipamento. Dentre as enterobactérias, o gênero Enterobacter foi isolado com maior frequencia (n=37, 38%). Foram ainda isoladas seis cepas de Salmonella spp. Das enterobactérias, 80% (n=79) foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano e 38% (n=37) a três ou mais. A expressão fenotípica presuntiva de b-lactamases do tipo AmpC foi detectada em 32 cepas. O gene blaCMY-2 não foi encontrado. Doze cepas apresentaram halos de inibição com screaning positivo para a pesquisa de ESBL. Foi detectada a presença do gene blaSHV em K. pneumoniae subsp. pneumoniae. O sequenciamento desse gene permitiu identificá-lo como sendo blaSHV-36. Dentre os Staphylococcus spp., oito foram identificados como coagulase-positivas (SCP) e 32 como coagulase-negativas (SCN). As oito cepas de SCP foram identificadas como S. aureus subsp. aureus. Dentre os SCN, as espécies identificadas com maior frequência foram: S. caprae (n=7, 17,5%), S. simulans (n=5, 12,5%) e S. epidermidis (n=4, 10%). Destas, 83% (n=33) foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano e 30% (n=12) foram resistentes a mais do que três. Duas cepas (5%) de S. epidermidis apresentaram perfil de resistência a até seis antimicrobianos e genes de resistência a meticilina, a eritromicina e a gentamicina. Todas as sete cepas que foram resistentes no TSA e na CIM a gentamicina, apresentaram o gene aac(2´)/aph(6´´). O gene ermB foi observado ainda em uma S hominis subsp hominis que apresentou resistência na CIM e no TSA. Foi detectada a presença de pelo menos um gene codificador de enteroxotxina em 83% (n=33) das cepas. O gene seg foi detectado em 11 cepas, o gene sei em 17 cepas e o gene sen em 31 cepas. Os resultados encontrados implicam as dietas preparadas com esses equipamentos como veículo de disseminação de enteropatógenos e Staphylococcus spp. com marcadores de resistência e genes codificadores de enterotoxinas relevantes no ambiente hospitalar.Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:13:57Z No. of bitstreams: 1 Roberta Fontanive Miyahira Tese completa.pdf: 7141955 bytes, checksum: fcfcddf911d62c17f99a4e06f2f371a2 (MD5)Made available in DSpace on 2021-01-07T15:13:57Z (GMT). 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