Caracterização da resistência aos antimicrobianos em enterobactérias isoladas de leite pasteurizado comercializado no município do estado do Rio de Janeiro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cirino, Fabiane Paula Soares da Costa
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UERJ
Texto Completo: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14385
Resumo: Milk is one of the most nutritionally complete foods, being rich in nutrients essential to the growth and maintenance of a balanced life and the process of pasteurization should contribute to the reduction of the incidence of important pathologies in humans. The objective of this study was to identify and determine the antimicrobial susceptibility profile of enterobacteria recovered from samples of pasteurized milk from two commercial brands, commercialized in the city of Rio de Janeiro. Thus, 15 milk samples of each brand were commercially purchased, making a total of 30 analyzed samples. The selective isolation was performed in BHI broth containing the antimicrobial ampicillin disk associated with sulbactan (10 / 10ug), to favor the isolation of resistant enterobacteria. From the growth, the cultures were seeded in EMB agar and, later, the presumptive colonies were stocked in Skim Milk (glycerol-10%) for later identification. The morpho-tinorial characteristics were observed by Gram staining and for the identification of the species were used conventional methodology and MALDI-TOF-MS. The antimicrobial susceptibility test was performed using the agar diffusion method, according to the CLSI (2016) reading criteria and recommendations. 25 antimicrobials tested were. The presence of resistance genes and the phylogenetic groups of <i>Escherichia coli</i> were determined using the polymerase chain reaction (PCR) technique. A total of 83 enterobacterial strains were identified, including <i>Enterobacter cloacae</i> (n = 35; 42%), <i>Raoultella ornithinolytica</i> (n = 25; 30%), <i>Escherichia coli</i> (n = 20; 24%) and <i>Hafnia alvei</i> = 03, 0.4%). Considering the brands studied, brand A presented a higher percentage of isolates of enterobacteria than brand B, 64 strains (77%) and 19 strains (23%), respectively. For the identification of the strains, the physiological characterization and the mass spectrometry (MALDI-TOF MS) were used, obtaining a concordance of 70% between the two methods. Susceptibility to all antimicrobials tested in <i>E. coli</i> (90%, n = 18/20), <i>E. cloacae complex</i> (26%, n = 9/35) and <i>R. ornithinolytica</i> (4%; n = 1/25 ). No amplification was observed in the PCR for the genes blaTEM, blaSHV, blaOXA-1LIKE, bla CTX-M, bla VEB, bla PER and blaGES, qnrA, qnrB, qnrS, qepA, catA, cmlA, floR, sul1, sul2, intl1 and aac (3) -IV, aphA1. All strains of <i>E. coli</i> were from phylogenetic group A (n = 20; 100%), related to commensal strains. In conclusion, the present research contributed to the knowledge of the species of enterobacteria and the profile of susceptibility to the antimicrobials that can be served through the pasteurized milk commercialized in the city of Rio de Janeiro.
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Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica Humana) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2017.http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14385Milk is one of the most nutritionally complete foods, being rich in nutrients essential to the growth and maintenance of a balanced life and the process of pasteurization should contribute to the reduction of the incidence of important pathologies in humans. The objective of this study was to identify and determine the antimicrobial susceptibility profile of enterobacteria recovered from samples of pasteurized milk from two commercial brands, commercialized in the city of Rio de Janeiro. Thus, 15 milk samples of each brand were commercially purchased, making a total of 30 analyzed samples. The selective isolation was performed in BHI broth containing the antimicrobial ampicillin disk associated with sulbactan (10 / 10ug), to favor the isolation of resistant enterobacteria. From the growth, the cultures were seeded in EMB agar and, later, the presumptive colonies were stocked in Skim Milk (glycerol-10%) for later identification. The morpho-tinorial characteristics were observed by Gram staining and for the identification of the species were used conventional methodology and MALDI-TOF-MS. The antimicrobial susceptibility test was performed using the agar diffusion method, according to the CLSI (2016) reading criteria and recommendations. 25 antimicrobials tested were. The presence of resistance genes and the phylogenetic groups of <i>Escherichia coli</i> were determined using the polymerase chain reaction (PCR) technique. A total of 83 enterobacterial strains were identified, including <i>Enterobacter cloacae</i> (n = 35; 42%), <i>Raoultella ornithinolytica</i> (n = 25; 30%), <i>Escherichia coli</i> (n = 20; 24%) and <i>Hafnia alvei</i> = 03, 0.4%). Considering the brands studied, brand A presented a higher percentage of isolates of enterobacteria than brand B, 64 strains (77%) and 19 strains (23%), respectively. For the identification of the strains, the physiological characterization and the mass spectrometry (MALDI-TOF MS) were used, obtaining a concordance of 70% between the two methods. Susceptibility to all antimicrobials tested in <i>E. coli</i> (90%, n = 18/20), <i>E. cloacae complex</i> (26%, n = 9/35) and <i>R. ornithinolytica</i> (4%; n = 1/25 ). No amplification was observed in the PCR for the genes blaTEM, blaSHV, blaOXA-1LIKE, bla CTX-M, bla VEB, bla PER and blaGES, qnrA, qnrB, qnrS, qepA, catA, cmlA, floR, sul1, sul2, intl1 and aac (3) -IV, aphA1. All strains of <i>E. coli</i> were from phylogenetic group A (n = 20; 100%), related to commensal strains. In conclusion, the present research contributed to the knowledge of the species of enterobacteria and the profile of susceptibility to the antimicrobials that can be served through the pasteurized milk commercialized in the city of Rio de Janeiro.O leite é um dos alimentos nutricionalmente mais completos, sendo rico em nutrientes essenciais ao crescimento e à manutenção de uma vida equilibrada. O processo de pasteurização deve contribuir com a redução da incidência, em seres humanos, de importantes patologias veiculadas por ele. O objetivo deste estudo foi identificar e determinar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos de enterobactérias recuperadas de amostras de leite pasteurizado, de duas marcas comerciais, comercializadas no município do Rio de Janeiro. Assim, 15 amostras de leite de cada marca foram adquiridas no comércio, perfazendo um total de 30 amostras analisadas. O isolamento seletivo foi realizado em caldo BHI contendo disco do antimicrobiano ampicilina associado ao sulbactan (10/10ug), para favorecer o isolamento de enterobactérias resistentes. A partir do crescimento, as culturas foram semeadas em ágar EMB e, posteriormente, as colônias presuntivas foram estocadas em Skim Milk (glicerol-10%) para posterior identificação. As características morfo-tintoriais foram observadas pela coloração de Gram e para a identificação das espécies foram utilizadas metodologia convencional e MALDI-TOF-MS. O teste de susceptibilidade aos antimicrobianos foi realizado pelo método de disco difusão em ágar, de acordo com os critérios de leitura e recomendações do CLSI (2016). Foram testados 25 antimicrobianos. A presença de genes de resistência e os grupos filogenéticos de <i>Escherichia coli</i> foram determinados através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Foram isoladas e identicadas 83 cepas de enterobactérias, a saber: complexo Enterobacter cloacae (n=35; 42%), <i>Raoultella ornithinolytica</i> (n=25; 30%), <i>Escherichia coli</i> (n=20; 24%) e <i>Hafnia alvei</i> (n=03; 0,4%). Para a identificação das estirpes foi utilizada a caracterização fisiológica e a espectrometria de massa (MALDI-TOF MS), obtendo-se concordância de 70% entre os dois métodos. Foi observada susceptibilidade a todos os antimicrobianos testados em <i>E. coli</i> (90%; n=18/20), complexo <i>E. cloacae</i> (26%; n=9/35) e <i>R. ornithinolytica</i> (4%; n=1/25). Não foi observada amplificação na PCR para os genes <i>bla</i>TEM, <i>bla</i>SHV, <i>bla</i>OXA-1LIKE, <i>bla</i> CTX-M, <i>bla</i> VEB, <i>bla</i> PER e <i>bla</i>GES, <i>qnrA, qnrB, qnrS, qepA, catA, cmlA, floR, sul1, sul2, intl1</i> e <i>aac(3) </i>-IV, <i>aph</i>A1. Todas as cepas de <i>E. coli</i> foram do grupo filogenético A (n= 20;100%), relacionado a cepas comensais. Em conclusão, a presente pesquisa contribuiu para o conhecimento das espécies de enterobactérias e do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos que podem ser veiculadas através do leite pasteurizado comercializado no município do Rio de Janeiro.Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:15:33Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FINAL_PUBLICADA_Fabiane_Paula_Soares_da_Costa_Cirino.pdf: 994758 bytes, checksum: 40023cef87414ee87d09c7cc15ef830b (MD5)Made available in DSpace on 2021-01-07T15:15:33Z (GMT). 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