Bioprospecção de antimicrobianos produzidos por fungos do solo amazônico com ação frente as principais bactérias multiresistentes

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Autor(a) principal: Lima, Rildo Mendes de
Data de Publicação: 2016
Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/1066014948975873
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM
Texto Completo: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7170
Resumo: O aumento no número de bactérias resistentes a múltiplas drogas nos últimos anos, tornou-se um problema mundial, aumentando a necessidade da descoberta e desenvolvimento de novos antimicrobianos. Dentre as principais bactérias caracterizadas como multiresistentes, podemos destacar o Staphylococcus aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA), o Enterococcus spp. resistente à vancomicina (VRE), as enterobactérias β-lactamase de espectro estendido (ESβL) e resistente à carbapêmicos (ERC), Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii multi-droga resistente (MDR). Diante desse contexto, dez linhagens fúngicas pertencentes a coleção de interesse médico do Instituto de Pesquisa da Amazônia – INPA, foram utilizadas neste estudo, a fim de realizar a bioprospecção de antimicrobianos produzidos por fungos de solo Amazônico, em virtude do grande potencial biotecnológico que esses microrganismos apresentam. Para investigar a atividade antimicrobiana, foram realizados bioprocessos para a produção do filtrado de cultura dos fungos e realizado o método de difusão em ágar. A determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), cromatografias em camada delgada, bioautografia e fator de retenção (Rf), foram realizados para o filtrado de cultura dos fungos que apresentaram atividade antimicrobiana. Para a caracterização química da fração com maior atividade antimicrobiana, foram utilizadas técnicas de fracionamento cromatográfico (cromatografia em camada delgada comparativa, extração líquido-líquido e cromatografia em coluna aberta), ressonância magnética nuclear (RMN) e espectrometria de massas (EM). O filtrado de cultura do Aspergillus (H63) e do Paecilomyces (H59) apresentaram atividade antimicrobiana pelo método de difusão em ágar, variante poço. O concentrado do filtrado do Aspergillus (H63) apresentou CIM de 1600 µg/mL para o S. aureus (MRSA) e o S. aureus (selvagem). O Paecilomyces (H59) apresentou CIM de 800 µg/mL para o S. aureus (MRSA), S. aureus (selvagem), Klebsiella pneumoniae (ESβL), K. pneumoniae (KPC) e Escherichia coli (selvagem); e de 400 µg/mL para o A. baumannii (OXA-23). O sistema de eluição acetato de etila/metanol (1:1 – v/v) revelou a presença de três zonas em UV 365 nm e a bioautografia determinou uma zona com atividade antimicrobiana. A fase acetato de etila apresentou atividade antimicrobiana pelo método de difusão em ágar frente ao S. aureus (MRSA). O sistema diclorometano/acetato de etila (1:9) obteve as melhores eleições, que foram separadas de acordo com a similaridade, gerando as frações 3-4, 5-7 e 8. A fração 5-7, apresentaram atividade antimicrobiana pelo método de difusão em ágar frente ao S. aureus (MRSA) e A. baumannii (OXA-23). A RMN e o EM revelou uma substância com atividade antimicrobiana, sendo necessário mais estudos para elucidação de sua estrutura química e avaliação de sua atividade antimicrobiana isoladamente das demais frações. Os resultados desse trabalho indicam que a bioprospecção de substâncias com atividade antimicrobiana produzidas por Paecilomyces (H59) é uma alternativa para a pesquisa de novos antimicrobianos frente a bactérias MDR.
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Diante desse contexto, dez linhagens fúngicas pertencentes a coleção de interesse médico do Instituto de Pesquisa da Amazônia – INPA, foram utilizadas neste estudo, a fim de realizar a bioprospecção de antimicrobianos produzidos por fungos de solo Amazônico, em virtude do grande potencial biotecnológico que esses microrganismos apresentam. Para investigar a atividade antimicrobiana, foram realizados bioprocessos para a produção do filtrado de cultura dos fungos e realizado o método de difusão em ágar. A determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), cromatografias em camada delgada, bioautografia e fator de retenção (Rf), foram realizados para o filtrado de cultura dos fungos que apresentaram atividade antimicrobiana. Para a caracterização química da fração com maior atividade antimicrobiana, foram utilizadas técnicas de fracionamento cromatográfico (cromatografia em camada delgada comparativa, extração líquido-líquido e cromatografia em coluna aberta), ressonância magnética nuclear (RMN) e espectrometria de massas (EM). O filtrado de cultura do Aspergillus (H63) e do Paecilomyces (H59) apresentaram atividade antimicrobiana pelo método de difusão em ágar, variante poço. O concentrado do filtrado do Aspergillus (H63) apresentou CIM de 1600 µg/mL para o S. aureus (MRSA) e o S. aureus (selvagem). O Paecilomyces (H59) apresentou CIM de 800 µg/mL para o S. aureus (MRSA), S. aureus (selvagem), Klebsiella pneumoniae (ESβL), K. pneumoniae (KPC) e Escherichia coli (selvagem); e de 400 µg/mL para o A. baumannii (OXA-23). O sistema de eluição acetato de etila/metanol (1:1 – v/v) revelou a presença de três zonas em UV 365 nm e a bioautografia determinou uma zona com atividade antimicrobiana. A fase acetato de etila apresentou atividade antimicrobiana pelo método de difusão em ágar frente ao S. aureus (MRSA). O sistema diclorometano/acetato de etila (1:9) obteve as melhores eleições, que foram separadas de acordo com a similaridade, gerando as frações 3-4, 5-7 e 8. A fração 5-7, apresentaram atividade antimicrobiana pelo método de difusão em ágar frente ao S. aureus (MRSA) e A. baumannii (OXA-23). A RMN e o EM revelou uma substância com atividade antimicrobiana, sendo necessário mais estudos para elucidação de sua estrutura química e avaliação de sua atividade antimicrobiana isoladamente das demais frações. Os resultados desse trabalho indicam que a bioprospecção de substâncias com atividade antimicrobiana produzidas por Paecilomyces (H59) é uma alternativa para a pesquisa de novos antimicrobianos frente a bactérias MDR.In recent years, the increase in the number of bacteria resistant to multiple drugs has become a worldwide problem, increasing the need to discover and develop new antimicrobials. Among the major bacteria characterized as multiresistant, we can highlight Staphylococcus aureus that is resistant to methicillin-oxacillin (MRSA), Enterococcus spp. vancomycin resistant (VRE), extended spectrum β-lactamase Enterobacteriaceae (ESβL) and carbapemic resistant (ERC), Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii multi-drug resistant (MDR). In view of this context, ten fungal lineages belonging to the collection of medical interest of the Institute of Amazonian Research (INPA) were used in the present study to carry out the bioprospection of antimicrobials produced by fungi of Amazonian soil, considering the great biotechnological potential of such microorganisms. In order to investigate the antimicrobial activity, bioprocesses were carried out to produce the fungal culture filtrate and the agar diffusion method was performed. The determination of Minimal Inhibitory Concentration (MIC), thin layer chromatography, bioautography and retention factor (Rf) were performed for the filtrate culture of the fungi that showed antimicrobial activity. For the chemical characterization of the fraction with the highest antimicrobial activity, chromatographic fractionation techniques (comparative thin-layer chromatography, liquid-liquid extraction and open-column chromatography), nuclear magnetic resonance (NMR) and mass spectrometry (MS) were used. The culture filtrate of Aspergillus (H63) and Paecilomyces (H59) showed antimicrobial activity by the agar diffusion method, well variant. The Aspergillus (H63) filtrate concentrate had a MIC of 1600 μg / mL for S. aureus (MRSA) and S. aureus (wild). Paecilomyces (H59) had MIC of 800 μg / mL for S. aureus (MRSA), S. aureus (wild), Klebsiella pneumoniae (ESβL), K. pneumoniae (KPC) and Escherichia coli (wild); and 400 μg / mL for A. baumannii (OXA-23). The ethyl acetate / methanol (1: 1 - v / v) elution system revealed the presence of three zones at UV 365 nm and bioautography determined an area with antimicrobial activity. The ethyl acetate phase presented antimicrobial activity by agar diffusion method against S. aureus (MRSA). The dichloromethane-ethyl acetate system (1: 9) obtained the best selections, which were separated according to the similarity, generating the fractions 3-4, 5-7 and 8. The fraction 5-7, presented antimicrobial activity by the agar diffusion method against S. aureus (MRSA) and A. baumannii (OXA-23). Finally, NMR and MS revealed a substance with antimicrobial activity, requiring further studies to elucidate its chemical structure and evaluation of its antimicrobial activity isolated from the other fractions. Our results indicate that the bioprospection of substances with antimicrobial activity produced by Paecilomyces (H59) is an alternative for the research of new antimicrobials against MDR bacteria.Universidade Federal do AmazonasFaculdade de Ciências FarmacêuticasBrasilUFAMPrograma de Pós-graduação em Ciências FarmacêuticasSouza, João Vicente Braga dehttp://lattes.cnpq.br/7804981785557071Matsuura, Ani Beatriz Jackischhttp://lattes.cnpq.br/5413782208141710Magalhães, Karen Regina Carim da Costahttp://lattes.cnpq.br/4015149205638769Lima, Rildo Mendes dehttp://lattes.cnpq.br/10660149489758732019-05-24T18:48:39Z2016-08-29info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfLIMA, Rildo Mendes. Bioprospecção de antimicrobianos produzidos por fungos do solo amazônico com ação frente as principais bactérias multiresistentes. 2016. 80 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2016.https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7170porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAMinstname:Universidade Federal do Amazonas (UFAM)instacron:UFAM2019-05-25T05:03:53Zoai:https://tede.ufam.edu.br/handle/:tede/7170Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://200.129.163.131:8080/PUBhttp://200.129.163.131:8080/oai/requestddbc@ufam.edu.br||ddbc@ufam.edu.bropendoar:65922019-05-25T05:03:53Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM - Universidade Federal do Amazonas (UFAM)false
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