Estudo qu?mico e biol?gico de fungos endof?ticos isolados de Deguelia duckeana

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Gomes, Lesli? de Azevedo
Data de Publicação: 2024
Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/9062484736146035, https://orcid.org/0009-0003-4729-7833
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM
Texto Completo: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/10145
Resumo: Nos ?ltimos anos, o estudo qu?mico dos fungos endof?ticos tem demostrado que eles produzem uma variedade de novos metab?litos secund?rios. Al?m disso, end?fitos f?ngicos podem desenvolver a capacidade de produzir subst?ncias similares ?s suas plantas hospedeiras, tornando-se uma alternativa ecol?gica na busca por subst?ncias bioativas. Diante disso, o objetivo do presente trabalho foi verificar o potencial qu?mico e biol?gico dos fungos endof?ticos isolados de Deguelia duckeana quanto a produ??o de subst?ncias bioativas. Para isso, folhas saud?veis de D. duckeana foram coletadas e desinfestadas. Ap?s a incuba??o de fragmentos foliares em meio BDA s?lido, os fungos endof?ticos foram isolados e purificados. Para obten??o de extratos brutos metan?licos do mic?lio, os fungos endof?ticos (14 cepas) foram cultivados em escala reduzida em meio Czapek acrescido de 0,2% extrato de levedura, a 30 ?C, sob modo agitado por 20 dias. Os extratos metan?licos foram submetidos aos m?todos de cromatografia em camada delgada, resson?ncia magn?tica nuclear de 1H (RMN de 1H) e avalia??o antibacteriana para sele??o de um fungo para cultivo em escala ampliada. O fungo selecionado foi cultivado nas mesmas condi??es iniciais e teve seus mic?lios extra?dos com diclorometano e metanol. O extrato metan?lico foi particionado com acetato de etila originando as fases hidrometan?lica e acetato de etila. Os extratos e fases foram submetidos a m?todos cromatogr?ficos, RMN, cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM), ensaio antibacteriano e de toxicidade frente ? Artemia salina. Foram isolados 28 fungos endof?ticos das folhas de D. duckeana, dos quais 14 fungos foram selecionados para cultivo submerso. As an?lises por cromatografia em camada delgada dos extratos metan?licos f?ngicos revelaram ind?cios de subst?ncias arom?ticas, alcaloides e terpenos. As an?lises por RMN de 1H confirmaram a presen?a de tais classes qu?micas. A triagem qu?mica direcionou a sele??o para os fungos codificados como BDDD14-G3, BDDD23-G5 e BDDD25-G4, que foram identificados como Diaporthe sp., Colletotrichum sp. e Diaporthe oculi, respectivamente. O extrato metan?lico de D. oculi destacou-se no ensaio antibacteriano e foi o fungo selecionado para cultivo em escala ampliada. O extrato diclorometano de D. oculi, foi submetido a fracionamentos cromatogr?ficos e levou ao isolamento do ergosterol e uma mistura de triacilglicer?is. A an?lise por CG-EM dos triacilglicer?is identificou a presen?a de 13 ?cidos graxos, sendo o ?cido palm?tico (27,9%) e o ?cido este?rico (16,5%) os ?cidos graxos metilados predominantes na mistura. O extrato diclorometano e as fases hidrometan?lica e acetato de etila do extrato metan?lico se mostraram n?o t?xicos contra Artemia salina. O extrato diclorometano inibiu 49,75% do crescimento de Escherichia coli. Esses resultados contribuem para a caracteriza??o qu?mica e biol?gica da microbiota endof?tica da esp?cie D. duckeana. Al?m disso, este ? o primeiro relato de estudo qu?mico para D. oculi. Estudos futuros poder?o continuar a explorar o potencial biotecnol?gico dos demais fungos de D. duckeana, bem como identificar outras subst?ncias presentes nos extratos de Diaporthe oculi com poss?veis potenciais biol?gicos.
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Ap?s a incuba??o de fragmentos foliares em meio BDA s?lido, os fungos endof?ticos foram isolados e purificados. Para obten??o de extratos brutos metan?licos do mic?lio, os fungos endof?ticos (14 cepas) foram cultivados em escala reduzida em meio Czapek acrescido de 0,2% extrato de levedura, a 30 ?C, sob modo agitado por 20 dias. Os extratos metan?licos foram submetidos aos m?todos de cromatografia em camada delgada, resson?ncia magn?tica nuclear de 1H (RMN de 1H) e avalia??o antibacteriana para sele??o de um fungo para cultivo em escala ampliada. O fungo selecionado foi cultivado nas mesmas condi??es iniciais e teve seus mic?lios extra?dos com diclorometano e metanol. O extrato metan?lico foi particionado com acetato de etila originando as fases hidrometan?lica e acetato de etila. Os extratos e fases foram submetidos a m?todos cromatogr?ficos, RMN, cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM), ensaio antibacteriano e de toxicidade frente ? Artemia salina. Foram isolados 28 fungos endof?ticos das folhas de D. duckeana, dos quais 14 fungos foram selecionados para cultivo submerso. As an?lises por cromatografia em camada delgada dos extratos metan?licos f?ngicos revelaram ind?cios de subst?ncias arom?ticas, alcaloides e terpenos. As an?lises por RMN de 1H confirmaram a presen?a de tais classes qu?micas. A triagem qu?mica direcionou a sele??o para os fungos codificados como BDDD14-G3, BDDD23-G5 e BDDD25-G4, que foram identificados como Diaporthe sp., Colletotrichum sp. e Diaporthe oculi, respectivamente. O extrato metan?lico de D. oculi destacou-se no ensaio antibacteriano e foi o fungo selecionado para cultivo em escala ampliada. O extrato diclorometano de D. oculi, foi submetido a fracionamentos cromatogr?ficos e levou ao isolamento do ergosterol e uma mistura de triacilglicer?is. A an?lise por CG-EM dos triacilglicer?is identificou a presen?a de 13 ?cidos graxos, sendo o ?cido palm?tico (27,9%) e o ?cido este?rico (16,5%) os ?cidos graxos metilados predominantes na mistura. O extrato diclorometano e as fases hidrometan?lica e acetato de etila do extrato metan?lico se mostraram n?o t?xicos contra Artemia salina. O extrato diclorometano inibiu 49,75% do crescimento de Escherichia coli. Esses resultados contribuem para a caracteriza??o qu?mica e biol?gica da microbiota endof?tica da esp?cie D. duckeana. Al?m disso, este ? o primeiro relato de estudo qu?mico para D. oculi. Estudos futuros poder?o continuar a explorar o potencial biotecnol?gico dos demais fungos de D. duckeana, bem como identificar outras subst?ncias presentes nos extratos de Diaporthe oculi com poss?veis potenciais biol?gicos.In recent years, the chemical study of endophytic fungi has shown that they produce a variety of new secondary metabolites. Additionally, fungal endophytes can develop the ability to produce substances similar to their host plants, becoming an ecological alternative in the search for bioactive compounds. Therefore, the objective of this study was to assess the chemical and biological potential of endophytic fungi isolated from Deguelia duckeana in terms of bioactive substance production. Healthy leaves of D. duckeana were collected and disinfested. After incubating leaf fragments on solid PDA medium, endophytic fungi were isolated and purified. For obtaining methanolic mycelium crude extracts, the endophytic fungi (14 strains) were cultivated on a reduced scale in Czapek medium supplemented with 0.2% yeast extract at 30 ?C, under shaking conditions for 20 days. Methanolic extracts were subjected to thin-layer chromatography (TLC), 1H nuclear magnetic resonance (1H-NMR), and antibacterial evaluation to select a fungus for large-scale cultivation. The selected fungus was cultivated under the same initial conditions, and its mycelia were extracted with dichloromethane and methanol. The methanolic extract was partitioned with ethyl acetate, yielding the hydro-methanolic and ethyl acetate phases. Extracts and phases underwent chromatographic methods, NMR, gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), antibacterial assay and toxicity assessment against Artemia salina. 28 endophytic fungi were isolated from D. duckeana leaves, of which 14 fungi were selected for submerged cultivation. Thin-layer chromatography analyses of fungal methanolic extracts revealed possible aromatic substances, alkaloids, and terpenes. 1H-NMR analyses confirmed the presence of such chemical classes. Chemical screening directed the selection to the fungi encoded as BDDD14-G3, BDDD23-G5, and BDDD25-G4, identified as Diaporthe sp., Colletotrichum sp., and Diaporthe oculi, respectively. The methanolic extract of D. oculi stood out in the antibacterial assay and was the selected fungus for large-scale cultivation. The dichloromethane extract of D. oculi underwent chromatographic fractionation, leading to the isolation of ergosterol and a mixture of triglycerides. GC-MS analysis of the triglycerides identified the presence of 13 fatty acids, with palmitic acid (27.9%) and stearic acid (16.5%) being the predominant methylated fatty acids in the mixture. The dichloromethane extract and the hydro-methanolic and ethyl acetate phases of the methanolic extract showed no toxicity against Artemia salina. The dichloromethane extract inhibited 49.75% of Escherichia coli growth. These results contribute to the chemical and biological characterization of the endophytic microbiota of the species D. duckeana. Additionally, this is the first report of a chemical study on D. oculi. Future studies may continue to explore the biotechnological potential of other fungi from D. duckeana, as well as identify other substances present in the extracts of Diaporthe oculi with potential biological activities.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gicoFAPEAM - Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado do AmazonasCAPES - Funda??o Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel SuperiorUniversidade Federal do AmazonasInstituto de Ci?ncias ExatasBrasilUFAMPrograma de P?s-gradua??o em Qu?micaNunez, Cecilia Veronicahttp://lattes.cnpq.br/2046473694108264Nunomura, Sergio Massayoshihttp://lattes.cnpq.br/6054286603565488Luiz, Jaine Honorata Hortolanhttp://lattes.cnpq.br/3433047807065363Gomes, Lesli? de Azevedohttp://lattes.cnpq.br/9062484736146035https://orcid.org/0009-0003-4729-78332024-07-17T19:24:29Z2024-01-26info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfGOMES, Lesli? de Azevedo. 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