Atividade antiproteolítica da emulsão à base de óleo de Copaifera Multijuga hayne: efeito nas metaloproteinases

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Autor(a) principal: Araújo, Eliane Avany Malveira
Data de Publicação: 2019
Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/9742977914817593
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM
Texto Completo: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7290
Resumo: Resina composta é um dos materiais mais usados para restaurar o dente através do uso dos sistemas adesivos, entretanto, nessas ligações dos sistemas adesivos ao dente ocorrem alguns problemas que prejudicam a longevidade desse tratamento, principalmente na camada hibrida. Na matriz extracelular dentinária encontram-se as proteases endógenas que são responsáveis pela desnaturação e degradação das fibras colágenas da dentina, a inibição dessas enzimas é crucial para a preservação da camada híbrida e sucesso clínico. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito das emulsões à base de óleo de copaíba em diferentes concentrações de conservante na inibição das metaloproteinases MMP-2 e MMP-9; a citotoxicidade em células da linhagem HT1080 e a atividade antiproteolítica in situ usando o sistema adesivo convencional e autocondicionante. Na zimografia in situ os trinta dentes foram seccionados a 2 mm abaixo da junção esmalte- dentina, em seguida foi padronizada a smear layer e divididos em quatro grupos. Uma gelatina conjugada com fluoresceína foi utilizada e depois levada ao microscópio de fluorescência para avaliação. A citotoxicidade das soluções foi testada utilizando o método do Azul de Tripan nos tempos de 15 segundos, 30 segundos, 10 e 20 minutos. Os grupos testados foram: (G1) controle com água destilada; (G2) Digluconato de clorexidina a 2% (CLX); (G3) emulsão à base de óleo de copaíba (EC) a 10% + X; (G4) EC a 10% + Y; e (G5) EC a 10% alcalina. O ensaio zimográfico foi realizado analisando os mesmos grupos descritos anteriormente, porém nos tempos de 30 segundos, 10 e 20 minutos. As células de HT1080 foram incubadas, e submetidas à eletroforese gel de SDS-PAGE. Após a corrida, o gel foi corado e as imagens das bandas foram analisadas no software ImageJ. Na análise estatística foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney para duas medianas e Kruskal-Wallis (p<0,05), para mais de duas medianas. No teste de citotoxidade as ECs apresentaram maior viabilidade celular quando comparadas à CLX em todos os tempos testados, apresentando diferença estatisticamente significativa nos tempos de 10 e 20 minutos. No ensaio zimográfico as EC apresentaram atividade sobre MMP 2 e MMP 9, contudo a que apresentou melhor resultado foi a EC a 10% alcalina em 10 minutos de tratamento, a EC alcalina chegou a reduzir em 67% a atividade da MMP 2 e 44% rda MMP 9 quando comparada ao digluconato de clorexidina a 2%. Na zimografia in situ não houve diferença estatística entre os grupos testados, entretanto na avaliação qualitativa todos os grupos testados apresentaram inibição da atividade sobre as metaloproteinases. Com isso, as emulsões à base do oléo de copaíba apresentaram atividade na inibição das metaloproteinases nos estudos in vitro e in situ, mostrando um potencial como biomodificador dentre elas a que apresentou os melhores resultados foi a Ec alcalina.
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O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito das emulsões à base de óleo de copaíba em diferentes concentrações de conservante na inibição das metaloproteinases MMP-2 e MMP-9; a citotoxicidade em células da linhagem HT1080 e a atividade antiproteolítica in situ usando o sistema adesivo convencional e autocondicionante. Na zimografia in situ os trinta dentes foram seccionados a 2 mm abaixo da junção esmalte- dentina, em seguida foi padronizada a smear layer e divididos em quatro grupos. Uma gelatina conjugada com fluoresceína foi utilizada e depois levada ao microscópio de fluorescência para avaliação. A citotoxicidade das soluções foi testada utilizando o método do Azul de Tripan nos tempos de 15 segundos, 30 segundos, 10 e 20 minutos. Os grupos testados foram: (G1) controle com água destilada; (G2) Digluconato de clorexidina a 2% (CLX); (G3) emulsão à base de óleo de copaíba (EC) a 10% + X; (G4) EC a 10% + Y; e (G5) EC a 10% alcalina. O ensaio zimográfico foi realizado analisando os mesmos grupos descritos anteriormente, porém nos tempos de 30 segundos, 10 e 20 minutos. As células de HT1080 foram incubadas, e submetidas à eletroforese gel de SDS-PAGE. Após a corrida, o gel foi corado e as imagens das bandas foram analisadas no software ImageJ. Na análise estatística foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney para duas medianas e Kruskal-Wallis (p<0,05), para mais de duas medianas. No teste de citotoxidade as ECs apresentaram maior viabilidade celular quando comparadas à CLX em todos os tempos testados, apresentando diferença estatisticamente significativa nos tempos de 10 e 20 minutos. No ensaio zimográfico as EC apresentaram atividade sobre MMP 2 e MMP 9, contudo a que apresentou melhor resultado foi a EC a 10% alcalina em 10 minutos de tratamento, a EC alcalina chegou a reduzir em 67% a atividade da MMP 2 e 44% rda MMP 9 quando comparada ao digluconato de clorexidina a 2%. Na zimografia in situ não houve diferença estatística entre os grupos testados, entretanto na avaliação qualitativa todos os grupos testados apresentaram inibição da atividade sobre as metaloproteinases. Com isso, as emulsões à base do oléo de copaíba apresentaram atividade na inibição das metaloproteinases nos estudos in vitro e in situ, mostrando um potencial como biomodificador dentre elas a que apresentou os melhores resultados foi a Ec alcalina.Composite resin is one of the most used materials to restore the tooth through the use of adhesive systems, however, in these bonding of adhesive systems to the tooth some problems that affect the longevity of this treatment occur, especially in the hybrid layer. In the dentin extracellular matrix are endogenous proteases that are responsible for denaturing and degradation of dentin collagen fibers, inhibition of these enzymes is crucial for the preservation of the hybrid layer and clinical success. The objective of this work was to evaluate the effect of copaiba oil-based emulsions at different preservative concentrations on the inhibition of metalloproteinases MMP-2 and MMP-9; cytotoxicity in HT1080 cells and in situ antiproteolytic activity using the conventional self-etching adhesive system. In situ zymography the thirty teeth were sectioned 2 mm below the enamel-dentin junction, then standardized to the smear layer and divided into four groups. Fluorescein-conjugated gelatin was used and then taken under the fluorescence microscope for evaluation. The cytotoxicity of the solutions was tested using the Trypan Blue method at 15 seconds, 30 seconds, 10 and 20 minutes. The groups tested were: (G1) control with distilled water; (G2) 2% Chlorhexidine Digluconate (CLX); (G3) 10% copaiba oil (EC) based emulsion + X; (G4) 10% EC + Y; and (G5) 10% alkaline EC. The zymographic test was performed by analyzing the same groups described above, but at times of 30 seconds, 10 and 20 minutes. HT1080 cells were incubated, and subjected to SDS-PAGE gel electrophoresis. After the run, the gel was stained and the band images were analyzed using ImageJ software. Statistical analysis used the nonparametric Mann-Whitney test for two medians and Kruskal-Wallis (p <0.05) for more than two medians. In the cytotoxicity test, the ECs presented higher cell viability when compared to CLX in all tested times, presenting a statistically significant difference at 10 and 20 minutes. In the zymographic assay, EC showed activity on MMP 2 and MMP 9, however the one that presented the best result was 10% alkaline EC in 10 minutes of treatment, alkaline EC reduced by 67% the activity of MMP 2 and 44%. MMP 9 compared to 2% chlorhexidine digluconate. In situ zymography there was no statistical difference between the tested groups, however in the qualitative evaluation all tested groups showed inhibition of activity on metalloproteinases. Thus, the emulsions based on the oil of copaiba showed activity in the inhibition of metalloproteinases in vitro and in situ studies, showing a potential as a biomodifier that presented the best results was the alkaline Ec.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoUniversidade Federal do AmazonasFaculdade de OdontologiaBrasilUFAMPrograma de Pós-graduação em OdontologiaBandeira, Maria Fulgência Costa Limahttp://lattes.cnpq.br/6480337217516258Carneiro, Flávia Cohenhttp://lattes.cnpq.br/3591975090418593Vasconcellos, Marne Carvalho dehttp://lattes.cnpq.br/8156683301306596Araújo, Eliane Avany Malveirahttp://lattes.cnpq.br/97429779148175932019-08-06T14:56:28Z2019-07-01info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfARAÚJO, Eliane Avany Malveira. Atividade antiproteolítica da emulsão à base de óleo de Copaifera Multijuga hayne: efeito nas metaloproteinases. 2019. 80 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2019.https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7290porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAMinstname:Universidade Federal do Amazonas (UFAM)instacron:UFAM2019-08-07T05:03:49Zoai:https://tede.ufam.edu.br/handle/:tede/7290Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://200.129.163.131:8080/PUBhttp://200.129.163.131:8080/oai/requestddbc@ufam.edu.br||ddbc@ufam.edu.bropendoar:65922019-08-07T05:03:49Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM - Universidade Federal do Amazonas (UFAM)false
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