Imunodiagnóstico com Beads Single e Multiplex para detecção de anticorpos contra as proteínas recombinantes Core, Ns3, Ns4B E Ns5A do vírus da hepatite C

• Autor(a) principal: Neves, Walter Luiz Lima
• Data de Publicação: 2020
• Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/1581438555369469
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM
• Texto Completo: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/8309
• topic: Infecções hepáticas; HCV CORE; Hepatite C crônica; Microbeads funcionalizadas; Hepatite C - Diagnóstico; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS; Proteínas recombinantes; Hepatite C; Citometria de fluxo; Beads

Introdução: As infecções hepáticas causadas por vírus estão entre as mais graves, com prevalência no mundo todo. O diagnóstico do HCV é feito por teste sorológicos para triagem e testes moleculares confirmatórios. Apesar dos testes diagnósticos utilizados atualmente apresentarem níveis elevados de sensibilidade e especificidade, ainda apresentam resultados falsos-negativos e positivos, além de apresentarem uma jornada de trabalho longa. Objetivo: Desenvolver um método single e multiplex para detecção de anticorpos contra as proteínas recombinantes CORE, Ns3, Ns4b e Ns5a do vírus da hepatite C, acopladas a microbeads funcionalizadas. Material e Métodos: As proteínas recombinantes do HCV CORE, Ns3, Ns4b e Ns5a foram expressas em E. coli BL21 (DE3) pLysS e purificadas por Ni-NTA. Para realização dos ensaios single e multiplex as proteínas foram acopladas a beads magnéticas carboxiladas. Foram utilizadas 30 amostras de soros HCV+ e 30 amostras de soros controles, para análise do reconhecimento de anticorpos contra as proteínas acopladas às beads, pelo método da citometria de fluxo. Resultados e conclusão: As proteínas recombinantes CORE, Ns3, Ns4b, Ns5a N-terminal e Ns5a C-terminal foram expressas com sucesso em hospedeiro E.coli e recuperadas na porção solúvel do extrato bacteriano utilizando coluna de níquel. As proteínas recombinantes acopladas em beads magnéticas foram imunorreativas para os soros de pacientes com hepatite C crônica, com alta sensibilidade e especificidade. O ensaio multiplex melhorou a sensibilidade e especificidade dos testes em comparação com os ensaios individuais.