Expressão gênica dos fatores de virulência da Shigella de amostras clínicas em modelo experimental murino

• Autor(a) principal: Barros, Ana Paula Miranda
• Data de Publicação: 2016
• Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/1614778510787844
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM
• Texto Completo: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7462
• topic: Bactérias gram-negativas; Shigella; Expressão gênica; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS; Expressão gênica; Modelo animal; Quantificação relativa; Fatores de Virulência

Introdução: Uma complexa sequência de eventos é iniciada durante o processo de invasão na Shigellose. A Shigella spp é um bacilo pertencente à família das enterobactérias cuja estratégia de virulência está relacionada à invasão epitelial e escape do sistema de defesa do hospedeiro. Em modelo in vivo, uma das metodologias utilizadas é a infecção pulmonar em murino, que apresenta boa caracterização para estudo do comportamento da Shigella durante a colonização de célula epitelial. Justificativa: O conhecimento do comportamento de amostras clínicas de Shigella selvagens da região amazônica com seus diferentes perfis de virulência e o efeito destes in vivo em modelo animal murino é inédito. Objetivo: Foi realizada a avaliação dos fatores de virulência expressos durante a infecção por cepas de Shigella spp da bacterioteca da Fiocruz em modelo murino. Material e Métodos: Foram realizados ensaios de PCR em tempo real para expressão gênica de 18 fatores de virulência com sete amostras de Shigella spp oriundas de um estudo realizado com 1500 crianças nos anos de 2007 a 2009 dos Hospitais Públicos de Manaus - Amazonas. Ocorreu a infecção intranasal com as cepas selvagens de Shigella em camundongos Balb/c para avaliação in vivo. A análise estatística foi submetida no t-Teste de Student para verificar a significância com p ˂ 0,05. Resultados: O estudo mostrou que os efetores IpaA, IpaB, IpaC e IpaD foram expressos positivamente nas sete amostras clínicas de Shigella. Os genes reguladores VirF e VirB foram expressos negativamente nas amostras testadas. Conclusão: O modelo de infecção baseado na inoculação intranasal em camundongos BALB/c é praticável. O quadro clínico patogênico em Balb/c evidenciou a ocorrência do processo infeccioso. A PCR em tempo real permitiu caracterizar as estratégias de virulência de cepas de Shigella . No período de 48h de infecção houve expressão positiva nas amostras clínicas dos genes do SST3 IpaA, IpaB, IpaC e IpaD e regulador VirA, e negativa de seus reguladores VirF e VirB, sugerindo que este panorama reflete os genes de virulência expressos durante a segunda fase da infecção por Shigella , mantida pela propagação célula-a-célula, na suas fases iniciais.