Avaliação etiológica de enterobactérias em pacientes soropositivos (HIV) e marcadores inflamatórios para disbiose intestinal e translocação microbiana
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Data de Publicação: | 2018 |
Outros Autores: | |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM |
Texto Completo: | https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7161 |
Resumo: | Introdução: Mesmo a diarreia sendo considerada uma das principais causas de mortalidade em pacientes com HIV, nosso estudo demonstrou um perfil diferente, apresentando altas incidências de constipação intestinal. A alta frequência de bactérias entéricas com potencial patogênico e a presença do marcador inflamatório sCD14 nestes individuos, demonstrou um possível processo de translocação microbiana e disbiose, sendo este cenário responsável por promover um estado de inflamação constante, o que induz a rápida progressão clinica da AIDS. Portanto, neste estudo procuramos verificar a ocorrência de co-infecções bacterianas, com potencial patogênico, e avaliar marcadores imunológicos de inflamação como preditores de translocação microbiana e ativação crônica, em pacientes com HIV/AIDS em Manaus. Metodologia e Resultados: Foram avaliados 52 pacientes com HIV, cadastrados na Fundação de Medicina Tropical Heitor Vieira Dourado, distribuídos quanto sua carga viral (</ou> 500 cópias de RNA e </ou> 200 CD4+ mm3). Para a identificação dos agentes etiológicos associados à diarreia foi realizado o isolamento por metodologia clássica, onde constatamos uma frequência de (38,46%) de Escherichia coli, seguido de Klebsiella spp. e Pseudomonas spp. (15,38%) respectivamente e em menor frequência Salmonella (3,84%) e Shigella (1,92%). Os isolados de Escherihia coli e Klebsiella, foram submetidos a técnica de PCR para verificação dos genes de virulência e resistência sendo obtidas amplificações para os genes eae, uidA, ast1 e dAAe (E.coli) e Kvar, blaCTX-M, blaKPC, blaVIM e blaIMP (Klebsiella spp). A avaliação de resistência a antimicrobianos foi realizada por teste de difusão em disco, onde foi observado que a maioria dos isolados testados foram resistentes ao antimicrobianos da classe das Cefalosporinas, o ensaio celular para a verificação dos fenótipos de adesão em Eschrichia coli detectou maior frequência de adesão difusa (55%) seguido de um fenótipo de adesão atípica (20%), para os isolado de Klebsiella spp. verificouse maior frequência de adesão agregativa (12,5%), ensaio de biofilme constatou que os isolados de Klebsiella spp e Pseudomonas spp. apresentavam potencial alto para produção do mesmo. A inflamação crônica foi avaliada pela dosagem de citocinas por citometria de fluxo onde foram observadas diferenças significativas entre os níveis de TNFα quando comparados os grupos entre si, com destaque para o grupo 1 e 3 (p= 0.001). A avaliação da translocação de produtos microbianos pela busca do marcador CD14 solúvel plasmáticos de ELISA demonstrou diferenças significativas em todos os grupos avaliados quando comparados aos contoles Grupo 1: 4953±4570; Grupo2: 582±1983; Grupo 3: 3396±4240; Grupo 4: 3769±4752. Conclusão: Por fim, a presença de patógenos bacterianos na flora de pessoas com HIV bem como a presença de marcadores de inflamação plasmáticos, podem indicar fatores de piora do quadro geral de saúde, bem como a cronicidade de estados inflamatórios. |
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Avaliação etiológica de enterobactérias em pacientes soropositivos (HIV) e marcadores inflamatórios para disbiose intestinal e translocação microbianaHIVEnterobacteriaTranslocação microbianaDisbioseMicrobial translocationDysbiosisCIÊNCIAS BIOLÓGICAS: IMUNOLOGIAIntrodução: Mesmo a diarreia sendo considerada uma das principais causas de mortalidade em pacientes com HIV, nosso estudo demonstrou um perfil diferente, apresentando altas incidências de constipação intestinal. A alta frequência de bactérias entéricas com potencial patogênico e a presença do marcador inflamatório sCD14 nestes individuos, demonstrou um possível processo de translocação microbiana e disbiose, sendo este cenário responsável por promover um estado de inflamação constante, o que induz a rápida progressão clinica da AIDS. Portanto, neste estudo procuramos verificar a ocorrência de co-infecções bacterianas, com potencial patogênico, e avaliar marcadores imunológicos de inflamação como preditores de translocação microbiana e ativação crônica, em pacientes com HIV/AIDS em Manaus. Metodologia e Resultados: Foram avaliados 52 pacientes com HIV, cadastrados na Fundação de Medicina Tropical Heitor Vieira Dourado, distribuídos quanto sua carga viral (</ou> 500 cópias de RNA e </ou> 200 CD4+ mm3). Para a identificação dos agentes etiológicos associados à diarreia foi realizado o isolamento por metodologia clássica, onde constatamos uma frequência de (38,46%) de Escherichia coli, seguido de Klebsiella spp. e Pseudomonas spp. (15,38%) respectivamente e em menor frequência Salmonella (3,84%) e Shigella (1,92%). Os isolados de Escherihia coli e Klebsiella, foram submetidos a técnica de PCR para verificação dos genes de virulência e resistência sendo obtidas amplificações para os genes eae, uidA, ast1 e dAAe (E.coli) e Kvar, blaCTX-M, blaKPC, blaVIM e blaIMP (Klebsiella spp). A avaliação de resistência a antimicrobianos foi realizada por teste de difusão em disco, onde foi observado que a maioria dos isolados testados foram resistentes ao antimicrobianos da classe das Cefalosporinas, o ensaio celular para a verificação dos fenótipos de adesão em Eschrichia coli detectou maior frequência de adesão difusa (55%) seguido de um fenótipo de adesão atípica (20%), para os isolado de Klebsiella spp. verificouse maior frequência de adesão agregativa (12,5%), ensaio de biofilme constatou que os isolados de Klebsiella spp e Pseudomonas spp. apresentavam potencial alto para produção do mesmo. A inflamação crônica foi avaliada pela dosagem de citocinas por citometria de fluxo onde foram observadas diferenças significativas entre os níveis de TNFα quando comparados os grupos entre si, com destaque para o grupo 1 e 3 (p= 0.001). A avaliação da translocação de produtos microbianos pela busca do marcador CD14 solúvel plasmáticos de ELISA demonstrou diferenças significativas em todos os grupos avaliados quando comparados aos contoles Grupo 1: 4953±4570; Grupo2: 582±1983; Grupo 3: 3396±4240; Grupo 4: 3769±4752. Conclusão: Por fim, a presença de patógenos bacterianos na flora de pessoas com HIV bem como a presença de marcadores de inflamação plasmáticos, podem indicar fatores de piora do quadro geral de saúde, bem como a cronicidade de estados inflamatórios.Even though diarrhea was considered a major cause of mortality in HIV patients, our study demonstrated a different profile, presenting high incidence of intestinal constipation, but the high frequency of enteric bacteria with pathogenic potential and the presence of the sCD14 inflammatory marker in these individuals, demonstrated a possible process of microbial translocation and dysbiosis, this scenario is responsible for promoting a state of constant inflammation, which induces the rapid clinical progression of AIDS. Therefore, in this study, we sought to verify the occurrence of bacterial co-infections with pathogenic potential and to evaluate immunological markers of inflammation as predictors of microbial translocation and chronic activation in patients with HIV / AIDS in Manaus. 52 HIV patients, registered at the Heitor Vieira Dourado Tropical Medicine Foundation, were distributed, as well as their viral load (<500 copies of RNA and <200 CD4 + mm3). For the identification of the etiological agents associated with diarrhea, isolation was performed by classical methodology, where we found a frequency of (38.46%) of Escherichia coli, followed by Klebsiella spp. E Pseudomonas spp. (15.38%) respectively and less frequently Salmonella (3.84%) and Shigella (1.92%). The isolates of Escherihia coli and Klebsiella, were submitted to PCR for virulence and resistance genes were amplified for the eae, uidA, ast1 and dAAe (E.coli) and Kvar, blaCTX-M, blaKPC, blaVIM and blaIMP (Klebsiella spp). The antimicrobial resistance evaluation was performed by disc diffusion test, where it was observed that most of the isolates tested were resistant to the antimicrobial class of Cephalosporins, the cell assay for the verification of the adhesion phenotypes in Eschrichia coli detected a higher frequency of diffuse adhesion (55%) followed by an atypical adhesion phenotype (20%) for the isolates of Klebsiella spp. (12.5%), a biofilm assay found that the isolates of Klebsiella spp. and Pseudomonas spp. presented high potential for its production. Chronic inflammation was assessed by cytokine dosing by flow cytometry where significant differences were observed between TNFα levels when compared to each other, especially group 1 and 3 (p = 0.001). The evaluation of the translocation of microbial products by search of soluble CD14 ELISA marker demonstrated significant differences in all groups evaluated when compared to the group 1: 4953 ± 4570; Group 2: 582 ± 1983; Group 3: 3396 ± 4240; Group 4: 3769 ± 4752. Finally, the presence of bacterial pathogens in the flora of people with HIV as well as the presence of markers of plasma inflammation may indicate factors of worsening of the general health picture, as well as the chronicity of inflammatory states.FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do AmazonasUniversidade Federal do AmazonasInstituto de Ciências BiológicasBrasilUFAMPrograma de Pós-graduação em Imunologia Básica e AplicadaNogueira, Patrícia Puccinelli Orlandihttp://lattes.cnpq.br/1887686774621627Rolim, Leonardo do Nascimentohttp://lattes.cnpq.br/6611135747695362Mariuba, Luis Andre Moraishttp://lattes.cnpq.br/4784959431673419Silva, Danielle Furtado dahttp://lattes.cnpq.br/19143173187354272019-05-23T15:04:08Z2018-08-28info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfSILVA, Danielle Furtado da. Avaliação etiológica de enterobactérias em pacientes soropositivos (HIV) e marcadores inflamatórios para disbiose intestinal e translocação microbiana. 2018. 131 f. Dissertação (Mestrado em Imunologia Básica e Aplicada) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2018.https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7161porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAMinstname:Universidade Federal do Amazonas (UFAM)instacron:UFAM2019-05-24T05:03:51Zoai:https://tede.ufam.edu.br/handle/:tede/7161Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://200.129.163.131:8080/PUBhttp://200.129.163.131:8080/oai/requestddbc@ufam.edu.br||ddbc@ufam.edu.bropendoar:65922019-05-24T05:03:51Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM - Universidade Federal do Amazonas (UFAM)false |
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