Padronização de protocolos e de extração de DNA total para o gênero marcetia DC. (Melastomataceae)

• Autor(a) principal: Macêdo, Rômulo Romeu Andrade
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFBA
• Texto Completo: http://repositorio.ufba.br/ri/handle/ri/28282
• topic: Recurso Vegetal; Campos Rupestres; Chapada Diamantina; Brometo de cetiltrimetilamônio; Polimerase

A etapa de extração de DNA é fundamental nos estudos moleculares. A obtenção e DNA de qualidade pode garantir o sucesso em todas etapas do trabalho, do mesmo modo, DNA de baixa qualidade ou em baixa quantidade pode inviabilizar as etapas seguintes. Para plantas, os protocolos mais usuais na extração e DNA são baseadas no uso o detergente CTAB no tampão de extração. No entanto, de acordo com os diferentes grupos vegetais adaptações ou mudanças nos protocolos são necessárias para otimizar o resultado. Este trabalho teve o objetivo de testar diferentes ensaios com mudanças que podem interferir na qualidade e quantidade de DNA extraído, tais como diferenças no peso da amostra (25 ou 50 mg), a utilização ou não de β-Mercaptoetanol e uma ou duas lavagens com clorofórmio-álcool isoamílico. O gênero alvo desse trabalho foi Marcetia DC. o qual já sabe ter uma série de espécies que contêm compostos secundários e portanto dificuldades na extração de DNA. Adicionalmente foram incluídas espécies de outros gêneros para a comparação. A análise foi feita comparando os resultados visualizados em gel de agarose a 1% e espectrofotômetro Nanodrop. A eficiência de extração não foi uniforme para todas as espécies e apesar de se observar uma facilidade em conseguir extrair DNA, este nem sempre apresentou boa qualidade. Os melhores resultados foram obtidos quando se utilizou 50mg de material seco, sem uso de β-Mercaptoetanol e com apenas uma lavagem de clorofórmio.