Seleção de anticorpos recombinantes (scFv-Fc) anti-KLK7 humana e caracterização de um sistema de hidrogel polimérico para drug delivery na pele

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Laureano, Ana Flávia Santarine
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFABC
Texto Completo: http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=122080
Resumo: Orientador: Prof. Dr. Luciano Puzer
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spelling Seleção de anticorpos recombinantes (scFv-Fc) anti-KLK7 humana e caracterização de um sistema de hidrogel polimérico para drug delivery na peleCALICREÍNAS TECIDUAIS HUMANASKLK7ANTICORPOS RECOMBINANTESPOLOXÂMEROSscFv-FcHUMAN TISSUE KALLIKREINSRECOMBINANT ANTIBODIESPOLOXAMERSPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOTECNOCIÊNCIA - UFABCOrientador: Prof. Dr. Luciano PuzerTese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, São Bernardo do Campo, 2020.As calicreínas teciduais humanas compõem o maior cluster de proteases do genoma humano. Estão amplamente distribuídas e são diferencialmente expressas em diversos tecidos. São relacionadas a diversas patologias, especialmente a cânceres regulados por hormônios e, são ainda reguladoras de eventos fisiológicos importantes como a descamação da pele. A KLK7 é uma das principais enzimas implicadas nesse processo e, em muitas condições dermatológicas, tais como dermatite atópica, síndrome de Netherton e psoríase, foi comprovada a desregulação na atividade dessa enzima. Bibliotecas de phage display são uma fonte preciosa para a geração de ligantes e novos anticorpos de alta especificidade e afinidade e, anticorpos recombinantes, são a classe de medicamentos que mais cresce no mercado atualmente. Associações de anticorpos com géis de compostos poliméricos não são usuais, porém esse tipo de nanomaterial pode se comportar como um sistema efetivo para o encapsulamento e drug delivery de diversas moléculas, dentre elas fragmentos de anticorpos, e, o sistema polímero-anticorpo pode ser utilizado como formulação para o tratamento de diversas patologias humanas. Este trabalho teve como objetivo selecionar e caracterizar anticorpos recombinantes contra KLK7 dentro de sistemas poliméricos de hidrogel para drug delivery na pele. A partir da biblioteca HAL9/10 um anticorpo do tipo scFv com IC50 = 2,3 nM foi selecionado e, após a maturação de afinidade por phage display 4 novos anticorpos do tipo scFv foram selecionados, com IC50 variando de 6,1 ¿ 0,52 nM. Dois sistemas baseados em poloxâmeros foram analisados quando associados com os anticorpos selecionados: F1 = 30% de poloxâmero 407 e F2 = 28% de poloxâmero 407 + 2% de poloxâmero 403. A caracterização físico-química foi feita por DLS e reologia. Foram realizados ainda ensaios de liberação e permeação em células de Franz (em membrana estratificada semelhante a pele e epiderme de orelha de porco). Ensaios inibitórios foram realizados a fim de verificar a atividade da KLK7 frente aos anticorpos inibidores após a liberação e permeação. Testes de citotoxicidade foram realizados em células Vero. Os sistemas polímero-anticorpo foram completamente validados e caracterizados com sucesso.Human tissue kallikreins are the largest cluster of proteases featured in the human genome. They are widely distributed and differentially expressed in many tissues. These enzymes are related with many pathologies, specially hormone regulated cancers and are regulators of important physiological events such as skin desquamation. KLK7 is one of the main enzymes implied in this process and, in many dermatological conditions, such as atopic dermatitis, Netherton syndrome and psoriasis, it has been proved the dysregulation of this enzyme. Phage display libraries are a resourceful reservoir for the generation of antibodies and ligands with high affinity and specificity and, recombinant antibodies are the class of drugs which presents the greatest growth in the market. Associations of antibodies with polymeric gels are not usual, but this kind of nanomaterial can behave as an effective system for encapsulating and the delivery of farraginous molecules, among them fragments of antibodies. Thus the system polymer-antibody can be used as a formulation in addressing a plethora of human pathologies. This work aimed to select and characterize phage display antibodies selected against human tissue kallikrein 7, and to develop a topical drug delivery system for these antibodies. Using HAL9/10, a scFv phage display library, one scFv antibody with IC50 = 2,3 nM was selected. After affinity maturation by phage display four new scFv-like antibodies were selected with IC50 ranging from 6,1 to 0,52 nM. Two poloxamer based systems were analyzed in association with the selected antibodies: F1 = 30% poloxamer 407 and F2 = 28% poloxamer 407 + 2% poloxamer 403. Physical-chemical characterization was accessed by DLS and rheology. Liberation and Franz cell permeation (stratified commercial membrane skin like and pig's ear skin) assays were performed. Inhibitory assays were performed to verify KLK7's activity towards the inhibitory antibodies after liberation and permeation. Cytotoxicity were carried out in Vero cells. The polymer-antibody systems were completely validated and characterized successfully.Puzer, LucianoSantos Júnior, Arnaldo Rodrigues dosChagas, Jair RibeiroSilva, Thomaz Rocha eOliveira, Vinicius de AndradeLaureano, Ana Flávia Santarine2020info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf107 f. : il.http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=122080http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=122080&midiaext=79132http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=122080&midiaext=79131Cover: http://biblioteca.ufabc.edu.br/php/capa.php?obra=122080porreponame:Repositório Institucional da UFABCinstname:Universidade Federal do ABC (UFABC)instacron:UFABCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2022-03-25T16:33:18Zoai:BDTD:122080Repositório InstitucionalPUBhttp://www.biblioteca.ufabc.edu.br/oai/oai.phpopendoar:2022-03-25T16:33:18Repositório Institucional da UFABC - Universidade Federal do ABC (UFABC)false
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