Captura e avaliação anti-inflamatória de compostos naturais seletivos frente a atividade enzimática e farmacológica de uma nova serino protease (CDTSP-2) de crotalus durissus terrificus.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cruz, Caroline Ramos da
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFABC
Texto Completo: http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=125894
Resumo: Orientador: Prof. Dr. Marcos Hikari Toyama
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spelling Captura e avaliação anti-inflamatória de compostos naturais seletivos frente a atividade enzimática e farmacológica de uma nova serino protease (CDTSP-2) de crotalus durissus terrificus.SERINE PROTEASECDTSP-2COMPOSTOS POLIFENÓLICOSINIBIDOR DO TIPO KUNITZCROTALUS DURISSUS TERRIFICUSPOLYPHENOLIC COMPOUNDSKUNITZ-TYPE INHIBITORSPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOSSISTEMAS - UFABCOrientador: Prof. Dr. Marcos Hikari ToyamaCoorientador: Prof. Dr. Marcos Antônio Oliveira.Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, Santo André, 2023.As serino proteases de venenos são toxinas enzimáticas e pertencem à classe de proteases que agem sobre diferentes fatores da cascata de coagulação. Sendo assim, essas enzimas são referidas como toxinas trombina símile exibindo capacidade coagulante in vitro por intermédio da degradação das cadeias ? e/ou ? do fibrinogênio e mesmo sendo uma proteína extremamente importante, elas estão presentes em concentrações ao redor de 2 a 5% do veneno seco de serpentes. A Cdtsp-2 é uma enzima com uma plataforma alfa beta esterásica com a tríade catalítica Ser, His e Asp e a interação molecular desta tríade com substratos proteicos seja o fibrinogênio, fatores de coagulação ou com receptores PAR (Protease Activated Receptor), importantes para a ação de serino proteases de venenos de serpentes, pois são proteínas transmembranares que, quando ativadas por proteases, desencadeiam uma série de respostas biológicas, como a agregação plaquetária, a inflamação e a sensibilização nociceptiva, além disso, os receptores PARs também estão presentes em células hepáticas. Objetivos: Assim este trabalho de tese mostrou duas linhas de ações: avaliação de flavonoides glicosilados e a investigação de inibidores de tripsina/ qumiotripsina de semente de plantas para inibição da atividade enzimática da Cdtsp-2 e a outra linha de investigação foi avaliar a capacidade desta toxina enzimática como agente hepatotóxica importante a ser considerado no envenenamento crotálico. Métodos: Neste trabalho foram realizados procedimentos para obtenção da Cdtsp 2 pelo fracionamento do veneno total seco de Crotalus durissus terrificus usando métodos bioquímicos e, além disso, usamos uma técnica ""clonagem de proteínas recombinantes em células livres"" usando kits comerciais contrapondo com os métodos convencionais de clonagem. Para avaliar a capacidade dos compostos naturais em inibir a atividade enzimática da Cdtsp-2 usamos os softwares livre como https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/; http://www.swisstargetprediction.ch/; https://www.ebi.ac.uk/chembl/. Assim Tivemos uma visão global dos compostos e o uso de ferramenta de molecular docking sendo selecionados dois flavonoides glicosilados (quercetin-3-O-QArabinosídeo (Qa) e quercetin-3-O-ramnosídeo (QRham)) isolados de Laguncularia Racemosa e entre os inibidores de tripsina de sementes foram testados os inibidores do tipo Kunitz. Para os ensaios de hepatoxicidade foram realizados experimentos usando camundongos como modelo de estudo. Conclusões: As proteínas clonadas funcionam, mas sem glicosilações encontradas na proteína nativa e seu rendimento foi satisfatório, mas o custo operacional é extremamente caro e inviável, a proteína Cdtsp-2 mostrou uma grande atividade hepatotóxica e esta atividade, bem como sua atividade edematogênica, miotóxica também foram fortemente inibidos pela prévia incubação com o inibidor EcTI, o qual é um inibidor do tipo Kunitz, já os flavonoides inibiram parcialmente as atividades enzimática e farmacológicas de edema e miotóxica da Cdtsp-2.Venom serine proteases are enzymatic toxins and belong to the class of proteases that act on different factors of the coagulation cascade. Thus, these enzymes are referred to as thrombin like toxins exhibiting in vitro coagulant capacity by degrading the ? and/or ? chains of fibrinogen, and even though they are an extremely important protein, they are present in concentrations around 2 to 5% of dried snake venom. Cdtsp-2 is an enzyme with an alpha-beta esterase platform with the catalytic triad Ser, His and Asp and the molecular interaction of this triad with protein substrates be it fibrinogen, coagulation factors or with PAR receptors (Protease Activated Receptor), important for the action of serine proteases from snake venoms, because they are transmembrane proteins that, when activated by proteases, trigger a series of biological responses, such as platelet aggregation, inflammation and nociceptive sensitization, in addition, PAR receptors are also present in liver cells. ObjEcTIves: Thus this thesis work showed two lines of actions: evaluation of glycosylated flavonoids and the investigation of trypsin/chymotrypsin inhibitors from plant seeds for inhibition of Cdtsp-2 enzymatic activity and the other line of investigation was to evaluate the capacity of this enzyme toxin as an important hepatotoxic agent to be considered in crotalic poisoning. Methods: In this work we performed procedures to obtain Cdtsp-2 by fractionation of total dried venom of Crotalus durissus terrificus using biochemical methods and, in addition, we used a technique "cloning recombinant proteins in free cells" using commercial kits against conventional cloning methods. To evaluate the ability of natural compounds to inhibit the enzymatic activity of Cdtsp-2 we used free software such as https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/; http://www.swisstargetprediction.ch/; https://www.ebi.ac.uk/chembl/. Thus we had an overview of the compounds and the use of molecular docking tool being selected two glycosylated flavonoids (quercetin-3-O-QArabinoside (Qa) and quercetin-3-O-ramnoside (QRham)) isolated from Laguncularia Racemosa and among the seed trypsin inhibitors were tested the Kunitz, Bowman Birk, Potato Type I and II inhibitors. For hepatoxicity assays experiments were performed using mice as study model. Conclusions: The cloned proteins work, but without glycosylations found in the native protein and their yield was satisfactory, but the operational cost is extremely expensive and unfeasible, the Cdtsp-2 protein showed a great hepatotoxic activity and this activity, as well as its edematogenic, myotoxic activity were also strongly inhibited by prior incubation with the EcTI inhibitor, which is a Kunitz-type inhibitor, already the flavonoids partially inhibited the enzymatic and pharmacological activities of edema and myotoxicity of Cdtsp-2.Toyama, Marcos HikariOliveira, Marcos AntônioSantos Júnior, Arnaldo Rodrigues dosCenteno, Danilo da CruzCuccovia, IolandaPrieto, Manuel José EstevezCruz, Caroline Ramos da2023info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf125 f. : il.http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=125894http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=125894&midiaext=81091Cover: http://biblioteca.ufabc.edu.br/php/capa.php?obra=125894porreponame:Repositório Institucional da UFABCinstname:Universidade Federal do ABC (UFABC)instacron:UFABCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-01-18T10:18:34Zoai:BDTD:125894Repositório InstitucionalPUBhttp://www.biblioteca.ufabc.edu.br/oai/oai.phpopendoar:2024-01-18T10:18:34Repositório Institucional da UFABC - Universidade Federal do ABC (UFABC)false
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