Caracterização das interações moleculares entre lectinas manose específicas tóxicas e o trato digestivo do pulgão da ervilha, Acyrthosiphon pisum (Harris)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Sousa, Flávia Andrea Mendonça de
Data de Publicação: 2001
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC)
Texto Completo: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/71228
Resumo: Este documento está disponível online com base na Portaria nº 348, de 08 de dezembro de 2022, disponível em: https://biblioteca.ufc.br/wp-content/uploads/2022/12/portaria348-2022.pdf, que autoriza a digitalização e a disponibilização no Repositório Institucional (RI) da coleção retrospectiva de TCC, dissertações e teses da UFC, sem o termo de anuência prévia dos autores. Em caso de trabalhos com pedidos de patente e/ou de embargo, cabe, exclusivamente, ao autor(a) solicitar a restrição de acesso ou retirada de seu trabalho do RI, mediante apresentação de documento comprobatório à Direção do Sistema de Bibliotecas.
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In this Thesis, we used the mannose/glucose-specific Canavalia brasiliensis (Con Br) lectin as a tool to isolate and identify molecular targets for lectins in the digestive tract of the pea aphid Acyrthosiphon písum Harris (Homoptera: Aphididae). In vitro toxicity assays were performed with-16 lectins including 9 from the Diocleinae subtribe. Statistical analysis of the mortality and growth inhibition curves show that all the Diocleinae lectins, with the exception of Dioclea grandiflora, exert toxic effects on the development of the insect. Con Br and lectins from Canavalia bonariensis, C.aff.sp.boliviana, Dioclea virgata and D.rostrata were found to be the most toxic ones, decreasing the average weight of the adult insects by 50 % in concentrations ranging from 100 to 122 μg.mL- '. The lectin from Abrus pulchellus was found to be extremely toxic, being able to kill 100% of the insects at their fourth day of development at a low dose (500 μg.mL-1)_ Lectin blot assays were performed on aphid gut protein extracts using biotin-labeled lectins from the Diocleinae group, such as Con Br, and lectins from C.ensiformis, Cratylia floribunda and D. violacea, and from monocotyledon group, such as from Galanthus nivalis, Listera ovata and Arum maculatum. Several proteins from the digestive tract of A.pisum were strongly recognized by both lectin groups. Moreover, quantitative differences were observed between groups and also within the monocotyledons group. Several proteins from the digestive tract of the insect were isolated by means of gel affinity chromatography, with Con Br-Agarose, followed by non-native two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis. Further studies performed on the isolated proteins allowed us to identify an aminopeptidase of apparent molecular weight 120 kDa and pl 5.0. Its partial nucleotide sequence was determined using a genomic library constructed from messenger RNA extracted from A.pisum digestive tract. The role of the aminopeptidase in the toxic effects exerted by the abovementioned lectins is discussed in this Thesis.As espécies da subtribo Diocleinae (Fabaceae) possuem lectinas isoladas de sementes cujas propriedades estruturais e físico-químicas são bastante similares. Neste estudo, utilizamos a lectina de Canavalia brasiliensis (Con Br), manose/glucose específica, como ferramenta no isolamento de alvos moleculares de lectinas no trato digestivo do pulgão da ervilha, Acyrthosiphon pisum Harris (Homoptera: Áphididae) tentando identificar possíveis receptores. Ensaios de toxicidade "in vitro" foram realizados com dezesseis lectinas, dentre elas nove da subtribo Diocleinae. A análise estatística das curvas de mortalidade e inibição do crescimento mostrou que, com exceção da lectina de Dioclea grandiflora, todas as outras exerceram algum efeito tóxico no desenvolvimento do inseto. Entre as mais tóxicas estão a Con Br e as lectinas de Canavalia bonariensis, de C.aff.sp. boliviana, de Dioclea virgata e de D.rostrata que, nas concentrações em torno de 100 a 122 4.mL-1, reduziram o peso dos adultos em 50 %. Dentre as outras lectinas testadas, a de Abrus pu/chel/us destacou-se como sendo extremamente tóxica matando 100 % dos insetos no quarto dia do desenvolvimento com doses de 500 pg.mL-1. O Lectin Blot, com as lectinas marcadas com biotina, utilizou Con Br e as lectinas de C.ensiformís, de Cratylia floribunda e de D.violacea como representantes do grupo das Diocleinae, e as lectinas de Galanthus nivalis, de Listera ovata e de Arum maculatum das Monocotiledôneas. Várias proteínas do trato digestivo de A.pisum foram reconhecidas fortemente pelos dois grupos. Entretanto diferenças quantitativas foram identificadas entre os grupos e dentro do grupo das Monocotiledôneas. Através de cromatografia de afinidade em gel de Con Br-Agarose foram isoladas proteínas do trato digestivo do inseto, seguido da separação em eletroforese bidimensional sob condições desnaturantes. Uma aminopeptidase de massa molecular aparente de 120 kDa e pl 5,0 foi identificada entre as várias proteínas de membrana. A sequência nucleotídica parcial da aminopeptidase foi determinada utilizando uma biblioteca genômica construída a partir do ARN mensageiro extraído de tratos digestivos do A.pisum. O envolvimento da aminopeptidase nos efeitos tóxicos exercidos pelas lectinas acima mencionadas são discutidos nesta Tese.Cavada, Benildo SousaSousa, Flávia Andrea Mendonça de2023-03-10T12:20:16Z2023-03-10T12:20:16Z2001info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfSOUSA, Flavia Andrea Mendonça de. Caracterização das interações moleculares entre lectinas manose específicas tóxicas e o trato digestivo do pulgão da ervilha, Acyrthosiphon pisum (Harris). 2001. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2001.http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/71228porreponame:Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC)instname:Universidade Federal do Ceará (UFC)instacron:UFCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2023-03-10T12:20:16Zoai:repositorio.ufc.br:riufc/71228Repositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.ufc.br/ri-oai/requestbu@ufc.br || repositorio@ufc.bropendoar:2024-09-11T18:53:51.439691Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC) - Universidade Federal do Ceará (UFC)false
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