Investigação do perfil proteômico de oreochromis niloticus (tilápia do nilo): identificação de proteínas relacionadas ao estresse causado por amônia
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2016 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC) |
Texto Completo: | http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/39357 |
Resumo: | The investigation of the proteome is an essential component to provide information about the proteins involved in stress. This study aims to determine possible changes in the expression profile of proteins induced by stress with ammonia in liver and gill tissues of Oreochromis. niloticus (Nile tilapia) and identify potential biomarkers related to stress, as well, purify a lectin identified in the liver of tilapia. The fish were grown in outdoor system and divided into two groups: negative control (they received no mechanical aeration) positive control (which received mechanical aeration of water). 10 fishes from each group were used for proteomic analysis. The proteins profiles were obtained by two-dimensional electrophoresis and identified by mass spectrometry. Lectin was isolated from liver of commercially available fish. Comparative proteomic analysis revealed changes in the expression of 24 spots in the liver and 6 spots in the gills at the negative control. The differentially expressed spots were subjected to analysis of mass spectrometry, with resulting identification of 5 proteins for liver and in gills were not identified. The altered expression levels proteins in the liver are involved in cell structure, signal transduction, protein modification, metabolism and transport, which can be strong candidates for ammonia biomarkers stress. This may be related to the recovery and cell protection by preventing severe damage to the cell. These results may provide a better understanding of the proteins that are involved in the stress response studied. It has also been isolated lectin of tilapia liver from the combination of affinity and ion exchange chromatographies, having a molecular weight estimated by SDS-PAGE at 26 kDa, was inhibited more efficiently by the 4-Nitrophenyl ß-Galactopironoside sugar, inhibiting the lectin activity at a concentration of 1,562 mM, exhibited toxicity at Artemia sp after 48 hours and showed interference in the formation of biofilms in concentrations of 31,25 and 62 5 µg/mL for Staphylococcus aureus and 125 and 250 µg/mL for Escherichia coli and inhibited significantly the number of viable cells in the tested bacteria. |
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Investigação do perfil proteômico de oreochromis niloticus (tilápia do nilo): identificação de proteínas relacionadas ao estresse causado por amôniaTilápiaAmôniaProteômicaBiomarcadoresLectinaThe investigation of the proteome is an essential component to provide information about the proteins involved in stress. This study aims to determine possible changes in the expression profile of proteins induced by stress with ammonia in liver and gill tissues of Oreochromis. niloticus (Nile tilapia) and identify potential biomarkers related to stress, as well, purify a lectin identified in the liver of tilapia. The fish were grown in outdoor system and divided into two groups: negative control (they received no mechanical aeration) positive control (which received mechanical aeration of water). 10 fishes from each group were used for proteomic analysis. The proteins profiles were obtained by two-dimensional electrophoresis and identified by mass spectrometry. Lectin was isolated from liver of commercially available fish. Comparative proteomic analysis revealed changes in the expression of 24 spots in the liver and 6 spots in the gills at the negative control. The differentially expressed spots were subjected to analysis of mass spectrometry, with resulting identification of 5 proteins for liver and in gills were not identified. The altered expression levels proteins in the liver are involved in cell structure, signal transduction, protein modification, metabolism and transport, which can be strong candidates for ammonia biomarkers stress. This may be related to the recovery and cell protection by preventing severe damage to the cell. These results may provide a better understanding of the proteins that are involved in the stress response studied. It has also been isolated lectin of tilapia liver from the combination of affinity and ion exchange chromatographies, having a molecular weight estimated by SDS-PAGE at 26 kDa, was inhibited more efficiently by the 4-Nitrophenyl ß-Galactopironoside sugar, inhibiting the lectin activity at a concentration of 1,562 mM, exhibited toxicity at Artemia sp after 48 hours and showed interference in the formation of biofilms in concentrations of 31,25 and 62 5 µg/mL for Staphylococcus aureus and 125 and 250 µg/mL for Escherichia coli and inhibited significantly the number of viable cells in the tested bacteria.A investigação do proteoma é um componente essencial para fornecer informações acerca das proteínas envolvidas em estresses. O presente trabalho tem o objetivo de determinar possíveis alterações no perfil de expressão de proteínas induzidas por estresse com amônia, em tecido hepático e branquial de Oreochromis niloticus (Tilápia do Nilo) e identificar possíveis biomarcadores relacionados a esse estresse, bem como, isolar e caracterizar uma lectina identificada no tecido hepático de tilápia. Os peixes foram cultivados em sistema outdoor e divididos em dois grupos: grupo experimental (que não recebeu aeração mecânica) grupo controle (que recebeu aeração mecânica da água). Foram utilizados 10 peixes de cada grupo para análise proteômica. O perfil das proteínas foi obtido através da técnica de eletroforese bidimensional e a identificação por espectrometria de massas. Para o isolamento e caracterização da lectina foi utilizado peixes comercialmente disponíveis. A análise proteômica comparativa revelou alteração na expressão de 24 spots no fígado e 6 spots em brânquias do grupo experimental. Os spots diferencialmente expressos foram submetidos à análise de espectrometria de massas, com identificação resultante de 5 proteínas para fígado e nenhuma para brânquias. As proteínas com nível de expressão alterado no fígado estão envolvidas na estrutura celular, transdução de sinal, modificação proteica, metabolismo e transporte, as quais podem ser fortes candidatas a biomarcadores de estresse por amônia. Estas podem estar relacionadas à recuperação e proteção celular, evitando danos severos na célula. Esses resultados podem fornecer uma melhor compreensão sobre as proteínas que estão envolvidas na resposta ao estresse estudado. Também foi isolada uma lectina do fígado de tilápia a partir da combinação das cromatografias de afinidade e troca iônica, apresentando um peso molecular estimado por SDS-PAGE em 26 kDa, foi inibida com mais eficiência pelo açúcar 4-Nitrofenil ß-Galactopironosídeo, inibindo a atividade lectínica a uma concentração de 1.562 mM, exibiu toxicidade a náuplios de Artemia sp após 48 horas e apresentou interferência na formação de biofilmes nas concentrações de 31,25 e 62, 5 μg/mL para Staphylococcus aureus e de 125 e 250 μg/mL para Escherichia coli e inibiu significantemente o número de células viáveis nas bactérias testadas.Nagano, Celso ShinitiMatos, Maria Nágila Carneiro2019-02-04T19:20:46Z2019-02-04T19:20:46Z2016info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfMATOS, Maria Nágila Carneiro. Investigação do perfil proteômico de oreochromis niloticus (tilápia do nilo): identificação de proteínas relacionadas ao estresse causado por amônia. 2016. 107 f. Tese (Doutorado em Engenharia de Pesca) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016.http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/39357porreponame:Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC)instname:Universidade Federal do Ceará (UFC)instacron:UFCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2019-02-28T18:26:01Zoai:repositorio.ufc.br:riufc/39357Repositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.ufc.br/ri-oai/requestbu@ufc.br || repositorio@ufc.bropendoar:2024-09-11T18:25:29.649118Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC) - Universidade Federal do Ceará (UFC)false |
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