Expressão temporal e comparativa de genes efetores intracelulares de Phytopythora parasitica durante a interação com citros.

• Autor(a) principal: CORREIA, Ana Luiza Guedes.
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFCG
• Texto Completo: http://dspace.sti.ufcg.edu.br:8080/jspui/handle/riufcg/9822
• topic: CRN; RXLR; Citrus aurantium; RT-qPCR; NCR

Espécies de Phytophthora, assim como muitos outros patógenos, secretam proteínas efetoras que são capazes de modular a imunidade inata da planta e promover a colonização do hospedeiro. As proteínas efetoras de oomicetos dividem-se em duas classes: efetores apoplásticos/extracelulares e citoplasmáticos/intracelulares. O objetivo desse trabalho foi analisar a expressão temporal e comparativa de genes efetores intracelulares de Phytophthora parasitica durante a interação com citros, por meio de RT-qPCR (reverse transcriptase-quantitative PCR). Para isso foram realizados bioensaios de interação de discos de folhas de laranja azeda (Citrus aurantium) e micélio do isolado IAC095 de Phytophthora parasitica, nos tratamentos inoculados e não inoculados (folhas apenas), nos tempos 0, 12, 24, 36 e 48 horas, com 5 repetições biológicas para cada tempo. RNAs total de cada uma das amostras de todos os tratamentos foram isolados pelo método com SDS/fenol e analisados quanto a quantidade e qualidade por eletroforese em gel de agarose e espectrofotometria. cDNAs fitas simples foram sintetizados para 3 repetições biológicas de cada tempo estudado/tratamento. As condições de cultivo e manseio do material vegetal e de Phytophthora parasitica durante o bioensaio foram fundamentais para a obtenção de RNAs de qualidade e para as respostas biológicas a serem analisadas. O método empregado para o isolamento de RNAs de folhas de citros e mistura de folhas de citros e Phytophthora parasitica foi bem sucedido. A quantidade e qualidade dos RNAs extraídos variaram entre as amostras, nos diferentes tempos estudados. DNA de Phytophthora parasitica amplificado com o primer CRN foi um bom controle positivo para comparar com amostras de RNAs digeridas com DNase I para eliminação de DNAs contaminantes. A quantidade dos cDNAs sintetizados estimada por espectrofotometria para DNA fita simples foi diagnóstico da presença dos cDNAs nas amostras. A expressão de genes efetores RXLR foi visualizada nas amostras I0h e I24h, de acordo com a análise quantitativa.