Estabilidade de genes de referÃncia e expressÃo das proteÃnas MorfogenÃticas Ãsseas (BMPs), receptores de BMP e mensageiros intracelulares (SMADS) em folÃculos ovarianos caprinos

• Autor(a) principal: Josà Jackson do Nascimento Costa
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC
• Texto Completo: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=7802
• topic: Caprinos; FolÃculos; OvÃrio; Genes de referÃncia; RNAm; BMPs; Goat; Follicles; Ovary; Housekeeping genes; mRNA; BMPs; BIOLOGIA MOLECULAR

Este trabalho tem como objetivo avaliar a estabilidade de genes de referÃncia e a expressÃo das proteÃnas morfogenÃticas Ãsseas (BMP-2, 4, 6, 7 e 15), seus receptores (BMPR-IA, IB e II) e seus mensageiros intracelulares (SMADs-1, 5 e 8) em folÃculos caprinos antes e apÃs cultivo por 18 dias. Para avaliar a estabilidade dos genes de referÃncia e o nÃvel de expressÃo das BMPs, receptores e SMADs, folÃculos com aproximadamente 0,2, 0,5 e 1 mm foram isolados mecanicamente de ovÃrios caprinos. AlÃm disso, folÃculos com aproximadamente 0,2 mm foram isolados e cultivados por 18 dias em meio de cultura suplementado com FSH. ApÃs a extraÃÃo do RNA total e sÃntese de cDNA, foi realizada a quantificaÃÃo do RNAm, por PCR em tempo real, utilizando-se primers especÃficos para genes de referÃncia (β-actina, PGK, GAPDH, β-tubulina, UBQ, RPL-19, rRNA18S), e para as BMPs (2, 4, 6, 7 e 15) receptores de BMPs (BMPR-IA, IB e II) e SMADs (1, 5 e 8). Os resultados mostraram que β-tubulina e PGK sÃo os genes de referÃncia mais estÃveis em folÃculos frescos prÃ-antrais e antrais caprinos. Os RNAs mensageiros para as BMPs (2, 4, 6, 7 e 15), seus receptores (BMPR-IA, IB e II) e SMADs (1, 5 e 8) sÃo expressos em diferentes nÃveis em folÃculos prÃ-antrais e antrais caprinos, sendo que a expressÃo do RNAm para BMP-4, BMP-6 e BMP-7 em folÃculos de 1 mm sÃo significativamente maiores do que em folÃculos de 0,2 e 0,5 mm. Entretanto, os nÃveis de RNAm para BMP-2 foi reduzido em folÃculos de 1 mm, jà os nÃveis de BMP-15 nÃo diferiram entre as categorias foliculares analisadas. Os nÃveis de RNAm para BMPR-IB foram maiores em folÃculos de 0,2 mm do que em folÃculos de 0,5 e 1 mm, enquanto que o RNAm para BMPR-II foi significativamente maior em folÃculos de 0,5 mm do que em folÃculos de 0,2 e 1 mm. Por outro lado, nÃveis de RNAm para BMPR-1A nÃo diferiram entre folÃculos analisados. Os nÃveis de RNAm para SMAD-5 foram significativamente maiores em folÃculos de 0,2 mm do que em folÃculos de 0,5 e 1 mm. Contudo, folÃculos de 0,5 mm mostraram nÃveis maiores de RNAm para SMAD-8 do que folÃculos de 0,2 e 1 mm. Os nÃveis de RNAm para SMAD-1 nÃo diferiram entre os folÃculos. ApÃs as comparaÃÃes dentro de cada categoria folÃcular, BMP-15 foi mais expressa do que BMP-7 em folÃculos de 0,2 e 0,5 mm. Em folÃculos de 0,5 mm a expressÃo do BMPR-IB foi maior do que BMPR-II. Em todas as trÃs categorias foliculares estudadas, a expressÃo da SMAD-5 foi superior a SMAD-8. ApÃs o cultivo, os folÃculos apresentaram reduÃÃo dos nÃveis de RNAm para BMP-2, BMP-4, BMP-7, BMPR-IA e SMAD-5. Em conclusÃo, β-tubulina e PGK sÃo os dois genes housekeeping mais estÃveis para folÃculos frescos caprinos com 0,2, 0,5 e 1 mm de diÃmetro. BMPs, seus receptores e SMADs apresentam padrÃes de expressÃo especÃficos em cada categoria folicular estudada. No entanto, em folÃculos cultivados hà uma variaÃÃo na expressÃo dos componentes do sistema BMP, diferindo da expressÃo in vivo de folÃculos com o mesmo tamanho.