BiodegradaÃÃo do Ãcido 2,4- diclorofenoxiacÃtico (2,4-D) por Burkholderia sp. SMF042

• Autor(a) principal: Antonio Francisco de Sousa
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC
• Texto Completo: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=12431
• topic: Burkholderia; BiodegradaÃÃo; Ãcido 2,4-diclorofenoxiacÃtico (2,4-D).; Burkholderia; Biodegradation; 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D); CIENCIAS BIOLOGICAS

BactÃrias do gÃnero Burkholderia possuem a capacidade de biodegradar inÃmeros compostos considerados poluentes. Mediante o exposto, este trabalho visou a identificaÃÃo molecular do isolado SMF042 oriundo de uma coleÃÃo de espÃcies de Burkholderia, verificar sua capacidade biodegradar o herbicida Ãcido 2,4-diclorofenoxiacÃtico (2,4-D), identificar as enzimas envolvidas neste processo por eletroforese bidimensional (2D) e a analisar a expressÃo dos genes tfdA e tfdB da via TFD de biodegradaÃÃo do 2,4-D. A fim de fazer a extraÃÃo de RNA e proteÃnas foi realizado o crescimento bacteriano em dois meios de cultivo BH (meio mineral), um controle, suplementado com glicose (600 mg/L), e outro suplementado com 2,4-D (600 mg/L). A extraÃÃo de RNA foi realizada na fase logarÃtmica enquanto a extraÃÃo de proteÃnas foi feita no inicio da fase estacionÃria de crescimento bacteriano. A partir das proteÃnas extraÃdas foi determinado o mapa bidimensional de referÃncia para cada condiÃÃo. O ajuste das imagens dos gÃis bidimensionais, a detecÃÃo de spots protÃico e a avaliaÃÃo dos dados para determinar variaÃÃes quantitativas e qualitativas, massa molecular (MW) e ponto isoelÃtrico (pI) dos spots foi feito pelo programa ImageMaster e a anÃlise da expressÃo dos genes, foi realizado por qRT-PCR empregando o mÃtodo da expressÃo relativa 2-ΔΔCT. Por meio da anÃlise do gene 16S rRNA o isolado SMF042 foi identificado como Burkholderia phymatum. No tocante a abordagem proteÃmica, o nÃmero mÃdio de spots das rÃplicas dos gÃis foi de 535 (controle) e 705 (tratado). A maior abundÃncia de proteÃnas foi observado nos gÃis na faixa de MW 20 e 40 KDa e pH 5-6. Enzimas envolvidas na biodegradaÃÃo do 2,4-D foram identificadas utilizando os valores de pI e MW do spot em comparaÃÃo com o banco de dados de proteÃnas no ExPASy, foram elas: 2,4-D alfa KG-dependente dioxigenase (tfdA) e clorocatecol 1,2-dioxigenase (tfdC) pertencentes a via TFD e 2,4-D oxigenase da via cadRABK, ambas de biodegradaÃÃo do 2,4-D. ProteÃnas envolvidas na resistÃncia ao estresse quÃmico, tambÃm foram identificadas, sendo elas: proteÃna GrpE e chaperona DnaK. O nÃvel de expressÃo do gene tfdA aumentou cerca de 23 vezes em relaÃÃo ao controle. Pelo exposto, o isolado SMF042 foi capaz de crescer em um meio contendo 2,4-D como Ãnica fonte de carbono, expressou proteÃnas de vias de biodegradaÃÃo do 2,4-D, resistÃncia ao estresse quÃmico e aumentou a expressÃo gÃnico de tfdA, o que indica a importÃncia desta bactÃria na biodegradaÃÃo deste poluente.