Estudo dos efeitos renais e mecanismos de morte celular induzidos pelo veneno da serpente Bothrops leucurus.

• Autor(a) principal: Isabel Cristina de Oliveira Morais
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC
• Texto Completo: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=7542
• topic: MDCK; Bothrops leucurus; MDCK; cell death; kidney; FARMACOLOGIA

Venenos de Bothrops consistem em uma mistura complexa de substÃncias ativas, principalmente peptÃdeos e proteÃnas, capazes de interferir com muitos processos fisiolÃgicos. Serpentes do gÃnero Bothrops sÃo responsÃveis por mais de 20 mil acidentes por ano no Brasil, que totalizam 90% de todos os acidentes ofÃdicos registrados. A Bothrops leucurus à uma serpente peÃonhenta importante que habita a regiÃo nordeste do Brasil. Os efeitos biolÃgicos devido ao envenenamento tÃm perfil semelhante ao observado em outras Bothrops, ou seja, a atividade coagulante, hemorrÃgica, fibrinolÃtica e insuficiÃncia renal in vivo. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do veneno de Bothrops leucurus no sistema de perfusÃo renal e em culturas de cÃlulas tubulares renais do tipo MDCK (Madin-Darby Canine kidney). Rins isolados de ratos Wistar pesando 250 a 300g (n = 5) foram perfundidos com Krebs-Henseleit contendo 6% de albumina sÃrica bovina previamente dialisadas por 120 minutos. Os efeitos do veneno de Bothrops leucurus (VBl) (10μg/mL) foram estudados sobre o Ritmo de FiltraÃÃo Glomerular (RFG), Fluxo UrinÃrio (FU), PressÃo de PerfusÃo (PP), ResistÃncia Vascular Renal (RVR), Percentual de Transporte Tubular de SÃdio (%TNa+), de PotÃssio (%TK+) e de Cloreto (%TCl-). O veneno de B. leucurus (10 μg / mL) reduziu a PP aos 90 e 120 min e o FU aos 60 e 90 min. O ritmo de filtraÃÃo glomerular diminuiu aos 60 e 90 min. A resistÃncia vascular renal diminuiu aos 120 min. Observou-se tambÃm uma diminuiÃÃo no percentual de transporte tubular de sÃdio (% TNA+) aos 120 min e de cloreto (% TCL-) aos 60 e 90 min. CÃlulas MDCK foram cultivadas em garrafas plÃsticas a 37ÂC em atmosfera de 5% de CO2, com meio RPMI 1640 suplementado com soro bovino fetal a 10%. O tratamento com VBl causou diminuiÃÃo da viabilidade celular atà na menor concentraÃÃo testada com um IC50 de 1,25 μg /mL. Citometria de fluxo com anexina V e iodeto de propÃdio mostrou que a morte celular ocorreu predominantemente por necrose de forma concentraÃÃo dependente. Quando a apoptose foi analisada atravÃs da coloraÃÃo nuclear, foi observado aumento significativo na porcentagem de morte celular, VBl nas concentraÃÃes de 2,5 e 1,5 μg/mL induziu 6,8% e 5,8% de apoptose apÃs 24 horas de tratamento, respectivamente. O tratamento com VBl (1,25 μg/mL) levou a despolarizaÃÃo significativa do potencial de membrana mitocondrial. Nas menores concentraÃÃes avaliadas, verificamos aumento de expressÃo de genes envolvidos na morte celular por apoptose. O Ãon Ca2+ participa da sinalizaÃÃo da morte celular induzida pelo veneno de B. leucurus. Esses resultados demonstram que o veneno de B. leucurus alterou todos os parÃmetros renais avaliados na perfusÃo de rim isolado e foi citotÃxico para cultura de cÃlulas MDCK.