ProspecÃÃo molecular e anÃlise funcional de short-peptides vegetais

• Autor(a) principal: Thiago Lustosa JucÃ
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC
• Texto Completo: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=12201
• topic: peptÃdeos vegetais; Calotropis procera; lÃtex; Jatropha curcas, sementes; plant short-peptides; Calotropis procera; latex; Jatropha curcas; seeds; BIOQUIMICA

Um nÃmero crescente de peptÃdeos isolados a partir dos mais diversos tecidos vegetais tem destacado essas molÃculas como alvo potencial de estudo. Estes peptÃdeos apresentam uma grande diversidade funcional e, por isso, vem sendo descritos frequentemente na literatura cientÃfica dos Ãltimos anos. No presente trabalho sÃo relatadas a prospecÃÃo molecular e caracterizaÃÃo funcional de âshort-peptidesâ vegetais. Inicialmente, o lÃtex de Calotropis procera foi particionado, gerando cinco fraÃÃes: hexÃnica (49,4%), diclorometano (5,2%), acetato de etila (2,0%), butanÃlica (2,1%) e aquosa (41,1%) (CapÃtulo 1). O perfil fitoquÃmico e as anÃlises espectroscÃpicas mostraram que a fraÃÃo diclorometano foi quimicamente a mais heterogÃnea. As fraÃÃes diclorometano e acetato de etila apresentaram toxicidade in vitro contra linhagens de cÃlulas tumorais (DL50 variando de 0,05 a 3,9 Âg/mL) e, in vivo, contra o crustÃceo Artemia salina (DL50 variando de 10,9 a 65,7 Âg/mL). Estas mesmas fraÃÃes apresentaram atividade antiinflamatÃria no modelo de peritonite induzida por carragenana em ratos, associadas a uma inibiÃÃo da migraÃÃo de neutrÃfilos de 67% (diclorometano) e 56% (acetato de etila). A reaÃÃo positiva com tolidina e ninidrina sugere a presenÃa de ciclopeptÃdeos na fraÃÃo bioativa acetato de etila. No CapÃtulo 2, vinte e uma sequÃncias primÃrias de peptÃdeos, oriundas da fraÃÃo 1 de sementes de Jatropha curcas, foram deduzidas por meio de sequenciamento de novo e confirmadas atravÃs de buscas contra um banco de dados genÃmico de Jatropha. A comparaÃÃo do padrÃo de fragmentaÃÃo por MS/MS entre o Ãon duplamente carregado de m/z de 671,79, presente nas fraÃÃes 1 e PII-C, e um peptÃdeo sintÃtico, anÃlogo Ãquele, mostrou que o uso de passos analÃticos adicionais para a identificaÃÃo e caracterizaÃÃo destes peptÃdeos nÃo seria necessÃrio. A ferramenta de busca BlastP mostrou que a sequÃncia APTLSGGSVPRDAD apresenta homologia e està inserida no domÃnio conservado das proteÃnas de embriogÃnese tardia (LEA_6). No CapÃtulo 3, os dois peptÃdeos sintÃticos anÃlogos, linear (1342,44 g/mol) e cÃclico (1324,44 g/mol), obtidos por sÃntese quÃmica em fase sÃlida, mostraram diferenÃas que caracterizam seus arranjos, quando comparados pelo padrÃo de fragmentaÃÃo por MS/MS e mobilidade iÃnica. O estado de carga e o tempo de retenÃÃo foram similares, do ponto de vista fÃsico-quÃmico. Os estudos de dicroÃsmo circular mostraram a presenÃa de um estado desordenado para os peptÃdeos. Os ensaios biolÃgicos com os peptÃdeos nÃo revelam sinais aparentes de atividade funcional, porÃm nÃo se pode descartar a possibilidade de que modelos biolÃgicos adicionais sejam testados. Os resultados advindos deste estudo geram novas perspectivas e servem de base para a realizaÃÃo de trabalhos subsequentes que tratem do isolamento e caracterizaÃÃo de peptÃdeos nas espÃcies Calotropis procera e Jatropha curcas.