Uso de diferentes crioprotetores na criopreservação de células somáticas de onça-pintada, Panthera onca (LINNAEUS, 1758)
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| Data de Publicação: | 2019 |
| Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
| Idioma: | por |
| Título da fonte: | Repositório Digital da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (RDU) |
| Texto Completo: | https://repositorio.ufersa.edu.br/handle/prefix/1764 https://repositorio.ufersa.edu.br/handle/prefix/3200 |
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Uso de diferentes crioprotetores na criopreservação de células somáticas de onça-pintada, Panthera onca (LINNAEUS, 1758)Congelação lentaCriobancos de células somáticasGênero PantheraCIENCIAS BIOLOGICAS::BIOTECNOLOGIAMonografiaNão possuiA onça-pintada, terceiro maior felino do mundo e o maior do continente americano, é um carnívoro de elevada importância ecológica e econômica. No Brasil, esta espécie encontra-se classificada como vulnerável à extinção e a formação de criobancos de recursos somáticos representa uma ferramenta interessante para a conservação da espécie. Contudo, alguns fatores podem afetar o sucesso desses bancos, como a solução de criopreservação empregada. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito do tipo de crioprotetor intracelular (dimetilsulfóxido, DMSO e etilenoglicol, EG) na ausência ou presença de um crioprotetor extracelular (sacarose, SAC) sobre a morfologia, confluência, viabilidade e atividade metabólica de células somáticas imediatamente após a descongelação e sete dias de cultivo in vitro. Para tanto, amostras de pele do pavilhão auricular apical (1–2 cm2) foram recuperadas de cinco onças-pintadas anestesiadas e pertencentes a zoológicos do Ceará, Paraíba e Pernambuco. Após o transporte por 3–8 h em meio essencial mínimo modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB) e 2% de solução de antibióticos-antimicóticos a 4°C, amostras foram tricotomizadas, fragmentadas (9,0 mm³) e cultivadas em DMEM contendo 10% de SFB e 2% de solução de antibióticosantimicóticos, a 38,5°C, numa atmosfera de 5% de CO2. A cada 24 h, amostras teciduais em cultivo foram monitoradas e quando as células atingiram 70% de confluência, células foram subcultivadas para obtenção da concentração desejada (1,0 x 105 células/mL). Para a criopreservação, células foram submetidas à congelação lenta em meio contendo DMEM acrescido de 10% de SFB e o crioprotetor, de acordo com os grupos: 10% de DMSO [DMSO], 10% de DMSO e 0,2 M de SAC [DMSO-SAC], 10% de EG [EG], e 10% de EG e 0,2 M de SAC [EG-SAC]. Antes da criopreservação (grupo controle), após a descongelação, e cultivo pósdescongelação, células foram avaliadas quanto às características morfológicas e confluência usando microscópio invertido. Além disso, células nesses mesmos momentos, foram submetidas ao ensaio de azul de tripan para quantificação da viabilidade. Adicionalmente, a atividade metabólica usando o ensaio de brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil tetrazolium] (MTT) foi mensurada antes e após cinco e sete dias de cultivo pós-descongelação. Todos os dados foram expressos como média ± erro padrão e comparações foram realizadas usando ANOVA seguido de teste de Tukey (P<0,05). Após cinco repetições (um animal/uma repetição), nenhuma diferença foi observada na morfologia nas células antes e após a descongelação, e cultivo pós-descongelação, ou seja, a morfologia foi consistente com um aspecto fusiforme e núcleo central ovalado. Além disso, a confluência observada foi similar entre todos os grupos. Quanto à viabilidade, uma taxa média de viabilidade de 97,8% ± 1,1 foi obtida antes da congelação. Após análise com azul de tripan imediatamente após a descongelação, células derivadas do grupo DMSO (53,7% ± 9,8), DMSO-SAC (58,6% ± 15,6), e EG-SAC (52,5% ± 14,9) apresentaram maiores taxas de viabilidade quando comparadas às células do grupo EG (45,8% ± 12,9). Além disso, no cultivo pós-descongelação, todas as células apresentaram similares taxas de viabilidade, sendo essas taxas superiores aos valores imediatamente após a descongelação. Já para a atividade metabólica, no dia 5 os grupos DMSO (77,0% ± 3,7) e DMSO-SAC (76,0 ± 2,7) foram superiores aos outros tratamentos, mas nenhuma diferença foi observada entre o grupo não criopreservado (100,0% ± 1,8) e criopreservados, no dia 7 de avaliação (DMSO: 89,1% ± 4,1; DMSO-SAC: 87,3% ± 4,8; EG: 85,7% ± 5,3; EG-SAC: 87,3% ± 5,0). Em conclusão, a combinação de DMSO ou EG e SAC foi eficiente na criopreservação de células somáticas de onças-pintadas. Adicionalmente, o cultivo pós-descongelação promoveu uma melhora da viabilidade de células somáticas. Essas informações irão contribuir para a formação de criobancos de recursos somáticos adequados para onças-pintadas.Trabalho não financiado por agência de fomento, ou autofinanciadoUniversidade Federal Rural do Semi-ÁridoBrasilCentro de Ciências Biológicas e da Saúde - CCBSUFERSAPereira, Alexsandra Fernandeshttp://lattes.cnpq.br/Queiroz Neta, Luiza Bento dehttp://lattes.cnpq.br/Praxedes, Érika Almeidahttp://lattes.cnpq.br/Oliveira, Lhara Ricarliany Medeiros de2019-12-09T14:19:11Z2019-12-09T14:19:11Z2019-02-25info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisapplication/pdfOliveira (2019) (OLIVEIRA, 2019)https://repositorio.ufersa.edu.br/handle/prefix/1764https://repositorio.ufersa.edu.br/handle/prefix/3200porOLIVEIRA, Lhara Ricarliany Medeiros de. Uso de diferentes crioprotetores na criopreservação de células somáticas de onça-pintada, Panthera onca (LINNAEUS, 1758). 2019. 55f. Monografia (Graduação em Biotecnologia), Centro de Ciências Biológicas e da Saúde, Universidade Federal Rural do Semi-Árido, Mossoró, 2019.CC-BY-SAinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Digital da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (RDU)instname:Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA)instacron:UFERSA2023-12-07T21:39:44Zoai:repositorio.ufersa.edu.br:prefix/3200Repositório Institucionalhttps://repositorio.ufersa.edu.br/PUBhttps://repositorio.ufersa.edu.br/server/oai/requestrepositorio@ufersa.edu.br || admrepositorio@ufersa.edu.bropendoar:2023-12-07T21:39:44Repositório Digital da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (RDU) - Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA)false |
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